Набор предназначен для количественного определения концентрации общего иммуноглобулина Е (IgE) в сыворотке крови “in vitro” методом твердофазного иммуноферментного анализа.
IgE — класс иммуноглобулинов, содержание которого в сыворотке крови в норме крайне мало. Концентрация IgE в сыворотке крови возрастает постепенно с момента рождения человека до подросткового возраста. У взрослых людей концентрация IgE в норме может достигать 100 МЕ/мл. В пожилом возрасте уровень IgE иногда снижается.
Продукция IgE имеет существенное значение в антигельминтозном иммунитете. При аскаридозе обнаруживается 15–20-кратное повышение концентрации IgE. Однако в развитых странах выявление повышенных концентраций IgE чаще связано с развитием аллергических заболеваний. Определение общего IgE имеет важное прогностическое значение. Его уровень выше 95 % верхнего возрастного предела нормы выявляют у 75 % детей, родители которых имеют аллергические заболевания. Выявление высоких концентраций общего IgE в сыворотке крови является важным вспомогательным средством, позволяющим дифференцировать аллергические заболевания среди множества патологий, клинически проявляющихся как астма, частые заболевания дыхательных путей, хронические риниты и дерматиты. Повышенные концентрации IgE в сыворотке крови отмечают также при гипер-IgE синдроме, лимфосаркоме.
2.1 Состав набора:
|
Наименование компонента |
Количество |
|
Иммуносорбент |
1 комплект |
|
Калибровочная проба С0 |
1 флакон; 0,5 мл или 1 флакон, лиофилизованный препарат |
|
Калибровочная проба С1 |
1 флакон; 0,5 мл или 1 флакон, лиофилизованный препарат |
|
Калибровочная проба С2 |
1 флакон; 0,5 мл или 1 флакон, лиофилизованный препарат |
|
Калибровочная проба С3 |
1 флакон; 0,5 мл или 1 флакон, лиофилизованный препарат |
|
Калибровочная проба С4 |
1 флакон; 0,5 мл или 1 флакон, лиофилизованный препарат |
|
Калибровочная проба С5 |
1 флакон; 0,5 мл или 1 флакон, лиофилизованный препарат |
|
Контрольная сыворотка |
1 флакон; 0,5 мл или 1 флакон, лиофилизованный препарат |
|
Конъюгат (Кг) |
1 флакон; 18 мл |
|
Раствор для разведения сыворотки (РР-С) |
1 флакон; 3 мл |
|
20-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т×20) |
2 флакона по 14 мл |
|
Раствор тетраметилбензидина (Раствор ТМБ) |
1 флакон, 14 мл |
|
Стоп-реагент |
1 флакон; 14 мл |
|
Закрывающийся пакет из полиэтиленовой пленки |
1 пакет |
|
Примечания 1 Точные значения концентрации IgE в калибровочных пробах и контрольной сыворотке указаны на этикетках флаконов. 2 Закрывающийся пакет из полиэтиленовой пленки входит в состав набора при упаковывании иммуносорбента в пакет из 2-слойного полиэтилена. |
|
2.2 Основные компоненты набора «ИФА-общий IgE» – иммуносорбент и конъюгат.
Иммуносорбент представляет собой комплект из двенадцати восьмилуночных полистирольных стрипов, в лунках которых сорбированы мышиные моноклональные антитела к общему IgE.
Конъюгат представляет собой мышиные моноклональные антитела к общему IgE человека, конъюгированные с пероксидазой хрена.
Калибровочные пробы – на основе сыворотки крови крупного рогатого скота или водно-солевого раствора, содержащие известные количества общего IgE, аттестованные по Второму международному референсному препарату для общего IgE WHO 75/502. Ориентировочные значения концентраций общего IgE в калибровочных пробах – 0; 10; 50; 100; 250; 500 МЕ/мл.
Контрольная сыворотка – на основе сыворотки крови человека или водно-солевого раствора с известным содержанием общего IgE.
2.3 Принцип работы набора. В наборе «ИФА-общий IgE» использован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к IgE. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата анти-IgE-пероксидаза, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация IgE, содержащегося в исследуемом образце, и связывание его с конъюгатом. При удалении содержимого из лунок и промывке происходит удаление избытка конъюгата анти-IgE-пероксидаза, не связавшегося с иммобилизованным в ходе инкубации IgE. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству IgE в исследуемом образце (Рис.1).
Рисунок 1 – Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна концентрации IgE в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация IgE в исследуемых образцах.
2.4 Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной пробы для измерения значения оптической плотности (ОП) раствора ТМБ. Всего – 96 определений при использовании всех стрипов одновременно.
Набор рассчитан на 4 постановки иммуноферментного анализа: 1 постановка – 3 стрипа (24 лунки).
Примечание – В случае дробного применения набор может быть использован только в течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2.5 Набор позволяет определять концентрацию IgE в сыворотке крови человека в диапазоне от 2,3 до 475,0 МЕ/мл.
2.6 Продолжительность анализа составляет 1 ч 45 мин.
3.1 Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. Однако работа со всеми исследуемыми образцами сыворотки (плазмы) крови человека, которые следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции, с отработанными растворами и жидкостями, различным оборудованием, которое может быть загрязнено в процессе анализа, требует определенных мер безопасности при использовании набора:
- работу необходимо проводить в специально оборудованном помещении;
- работать необходимо с применением средств индивидуальной защиты и с соблюдением мер предосторожности в соответствии с требованиями [1], [2], и [3].
3.2 Стоп-реагент, представляет собой 1Н раствор соляной кислоты и обладает раздражающим действием. В случае попадания стоп-реагента на кожу и слизистые необходимо немедленно промыть пораженный участок большим количеством проточной воды.
3.3 При работе с набором рабочие места должны быть обеспечены приточно-вытяжной вентиляцией.
3.4 Все лица, работающие в лаборатории с наборами, должны проходить обязательный медицинский осмотр в соответствии с требованиями [4].
3.5 Утилизация медицинских отходов и/или неиспользованных наборов с истекшим сроком годности должна производиться в соответствии с требованиями [5].
4.1 Для исключения ложных результатов исследуемые образцы сыворотки крови человека необходимо готовить и хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Необходимо осветлять образцы сыворотки крови человека, содержащие агрегированные компоненты сыворотки или осадок, при помощи центрифугирования в течение 5 мин при скорости вращения (1000-1500) об/мин. Образцы сыворотки крови человека можно хранить при температуре (2-8) °С не более 48 ч. При необходимости более длительного хранения (до 3 месяцев) рекомендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре минус 20 °С и ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
Для проведения анализа не следует использовать плазму крови человека, образцы сыворотки крови человека с гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным проростом, содержащие азид натрия, а также длительно хранившиеся без замораживания.
Надежность результатов зависит от выполнения следующих правил:
- не допускается использование набора после окончания срока годности, а также смешивание компонентов наборов разных серий;
- для приготовления каждого реагента должна использоваться отдельная емкость;
- вся используемая для приготовления реагентов посуда должна быть тщательно вымыта и сполоснута дистиллированной водой;
- необходимо обратить внимание на тщательное перемешивание реагентов;
- запрещается возвращать избыток Кг, раствора ТМБ и стоп-реагента из ванночек во флаконы;
- из флаконов с открытыми крышками происходит испарение, которое может привести к получению некорректных результатов при повторном использовании реагентов. После окончания внесения реагентов в лунки планшета на каждой стадии анализа необходимо плотно закрывать крышки флаконов и помещать в рекомендуемые условия хранения;
- каждый образец сыворотки крови человека, а также реагенты набора необходимо отбирать отдельным наконечником.
- не допускается подсыхание лунок на всех этапах постановки ИФА;
- необходимо использовать пипетки полуавтоматические со сменными наконечниками, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);
- во время проведения анализа следует избегать попадания прямых солнечных лучей на рабочую поверхность.
4.2 При вскрытии и растворении лиофилизованных компонентов необходимо следить, чтобы на крышке и стенках флаконов не оставалось сухого вещества.
4.3 При использовании набора для проведения нескольких независимых серий анализов необходимо иметь в виду, что для каждого независимого эксперимента необходимо построение новой калибровочной кривой и рекомендуется определение концентрации IgE в контрольной сыворотке.
5.1 Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов в лунках планшета при длине волны 450 нм;
- термостатируемый шейкер, позволяющий производить встряхивание с амплитудой колебаний (3-4) мм и частотой (8-13) Гц ((400-800) об/мин) при температуре 37 °С;
- холодильник бытовой, поддерживающий температуру (2-8) °С;
- полу- или автоматическое устройство для промывания планшетов (вошер);
- пипетки одноканальные автоматические переменного объема со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,05 до 5,0 мл (от 5 до 5000 мкл);
- пипетки 8-ми канальные автоматические переменного объема со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости до 0,3 мл (до 300 мкл);
- мерный цилиндр вместимостью 500 мл;
- ванночки для реагентов или чашки Петри (диаметр 100 мм);
- пробирки одноразовые с пробками вместимостью 3 мл или флаконы стеклянные вместимостью (10-15) мл;
- штатив для пробирок;
- вата медицинская гигроскопическая;
- бумага фильтровальная;
- перчатки резиновые хирургические;
- раствор с объемной долей этилового спирта 70 %;
- раствор с массовой долей перекиси водорода 6 %;
- вода дистиллированная или деионизированная;
- контейнер для сбора твердых отходов;
- контейнер для слива жидких отходов.
6.1 Набор реагентов перед проведением анализа извлечь из холодильника, открыть крышку коробки и выдержать компоненты набора при температуре (18-25) °С в течение 30 мин, но не более 1 ч.
Внимание! Все образцы сывороток и реагенты перед проведением анализа тщательно перемешать!
6.2 Подготовка иммуносорбента
Вскрыть пакет и установить на рамку необходимое количество стрипов иммуносорбента. Оставшиеся стрипы поместить в пакет с этикеткой (при упаковывании иммуносорбента в пакет из 2-слойного полиэтилена), который затем вложить в закрывающийся пакет из полиэтиленовой пленки и герметично закрыть.
Стрипы иммуносорбента можно хранить в пакете с герметично закрытым замком при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности.
6.3 Подготовка растворов калибровочных проб и контрольной сыворотки
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыворотки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенкам флаконов или пробкам. Открыть флаконы и положить пробки перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сывороткой внести по 0,5 мл (500 мкл) дистиллированной воды. Флаконы закрыть пробками, выдержать в течение 10 мин при температуре (18-25) °С и аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая образования пены. В течение следующих 10 мин выдержать флаконы при температуре (18-25) °С, периодически перемешивая их содержимое.
Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использованию.
Растворенные калибровочные пробы и контрольную сыворотку, а также вскрытые флаконы с жидкими калибровочными пробами и контрольной сывороткой можно хранить при температуре (2-8) °С не более 1 месяца.
6.4 Приготовление раствора для промывания планшета
В мерный цилиндр вместимостью 500 мл внести содержимое флакона с ФСБ-Т×20, затем добавить дистиллированной воды до метки 280 мл и аккуратно перемешать раствор, избегая образования пены.
В случае использования одного или несколько стрипов содержимое флакона с ФСБ-Т×20 интенсивно встряхнуть в течение (20-30) с, отобрать необходимое количество ФСБ-Т×20 в мерный стакан или цилиндр и развести его дистиллированной водой в 20 раз.
Пример – В мерный цилиндр внести 5 мл ФСБ-Т×20 и 95 мл дистиллированной воды, перемешать раствор, избегая образования пены.
Раствор для промывания планшета можно хранить закрытым при температуре (2-8) °С не более 5 суток.
Неиспользованный ФСБ-Т×20 можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
6.5 Подготовка Кг, РР-С и раствора ТМБ
Кг, РР-С и раствор ТМБ готовы к использованию. Расход Кг на один стрип (8 лунок) составляет 1,5 мл; расход раствора ТМБ на один стрип – 1,15 мл.
После вскрытия флаконов растворы можно хранить при температуре (2-8) °С не более 1 месяца.
6.6 Подготовка стоп-реагента
Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип составляет 1,15 мл.
После вскрытия флакона раствор можно хранить при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности.
6.7 Подготовка проб исследуемых образцов сыворотки крови человека
Если значения концентрации IgE в исследуемых образцах сыворотки крови по предварительным данным превышает значение концентрации калибровочной пробы С5, МЕ/мл, то исследуемые образцы следует развести РР-С в 20 раз.
Пробирки для разведения исследуемых образцов сыворотки крови человека поместить в штатив и маркировать следующим образом: №1, №2 и т.д.
Пример
1 Образец № 1 (разведение в 20 раз): в пробирку, маркированную «№ 1», внести 0,19 мл (190 мкл) РР-С и 0,01 мл (10 мкл) исследуемого образца сыворотки крови, тщательно перемешать раствор, избегая образования пены.
Внимание! Разводить образцы сыворотки крови следует только в день проведения анализа. При повторной постановке тех же образцов сыворотки крови человека необходимо делать новое разведение.
7.1 Для промывания планшета рекомендуется использовать автоматический или полуавтоматический промыватель – вошер; в случае отсутствия вошера можно промывать лунки 8-канальной пипеткой;
- на всех этапах промывания необходимо контролировать заполнение всех лунок и полное удаление (аспирацию) жидкости из них;
- необходимо при каждом промывании все лунки заполнить раствором до краев (0,30-0,35 мл в лунку), без переполнения и перетекания жидкости из соседних лунок, встряхнуть планшет на шейкере в течение (5-10) с с последующим декантированием;
- при каждом декантировании тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамкой со стрипами в перевернутом положении по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена;
- некачественное промывание планшета приводит к получению некорректных результатов.
8.1 Составить протокол маркирования лунок в соответствии с рисунком 1.
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
A |
ТМБ |
ТМБ |
№1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
B |
С0 |
С0 |
№1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
C |
С1 |
С1 |
№2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
D |
С2 |
С2 |
№2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
E |
С3 |
С3 |
№3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
F |
С4 |
С4 |
№3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
G |
С5 |
С5 |
№4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H |
КС |
КС |
№4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Рисунок 1
Лунки маркировать следующим образом:
- А1, А2 — для измерения величины ОП раствора ТМБ;
- В1, В2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С0;
- С1, С2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С1;
- D1, D2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С2;
- E1, E2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С3;
- F1, F2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С4;
- G1, G2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С5;
- Н1, Н2 — для измерения величины ОП контрольной сыворотки (КС);
- А3,В3 - …. — для измерения величины ОП образцов исследуемых сывороток крови человека №1 - ….
8.2 Внести во все лунки стрипов иммуносорбента, кроме лунок А1 и А2, по 0,15 мл (150 мкл) Кг.
8.3 Внести в дубликатах в соответствующие лунки стрипов иммуносорбента по 0,02 мл (20 мкл) калибровочных проб и контрольной сыворотки, в оставшиеся лунки – по 0,02 мл (20 мкл) проб исследуемых образцов сыворотки крови.
Внимание! Общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и проб исследуемых образцов сыворотки крови не должно превышать 15 мин, иначе время инкубации разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным результатам!
8.4 Инкубировать планшет на термостатируемом шейкере со скоростью (500-800) об/мин при температуре (37±1) °С в течение 1 ч 30 мин либо в термостате при температуре (37±1) °С в течение 2 ч 15 мин.
8.5 Удалить содержимое лунок с помощью промывателя в контейнер с дезинфицирующим раствором, затем промыть лунки планшета раствором для промывания планшета (п 6.4) пять раз.
8.6 Внести немедленно во все лунки по 0,1 мл (100 мкл) раствора ТМБ и инкубировать планшет в защищенном от света месте при температуре (18-25) °С в течение (15-30) мин в зависимости от степени развития окраски или на термостатируемом шейкере со скоростью (500-800) об/мин при температуре (37±1) °С в течение 10 мин.
8.7 Остановить реакцию путем внесения во все лунки стрипов иммуносорбента по 0,1мл (100 мкл) стоп-реагента с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор ТМБ.. Планшет встряхнуть на шейкере в течение (1-2) мин.
Внимание! В лунках планшета иммуносорбента с образцами, содержащими IgE, произойдет изменение окраски раствора с голубой на желтую различной интенсивности.
Примечание – Максимальная ОП не должна превышать пределов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная ОП – не более 2,5 ОЕ.
8.8 Не позже чем через 1 мин после остановки реакции, определить ОП в лунках стрипов иммуносорбента в одноволновом режиме при длине волны 450 нм.
В случае невозможности по техническим причинам своевременно измерить ОП растворов в лунках на фотометре, планшет можно хранить при температуре (2-8) °С не более 20 мин.
8.9 Схема анализа приведена в таблице 1.
Таблица 1 – Схема проведения анализа
|
Стадия анализа и реагенты |
Номер пары лунок в соответствии с протоколом маркировки лунок по п 8.1 |
||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9-48 |
|
|
Конъюгат Е, мкл |
– |
150 |
150 |
150 |
150 |
150 |
150 |
150 |
150 |
|
КП С0, мкл |
– |
20 |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
|
КП С1, мкл |
– |
– |
20 |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
|
КП С2, мкл |
– |
– |
– |
20 |
– |
– |
– |
– |
– |
|
КП С3, мкл |
– |
– |
– |
– |
20 |
– |
– |
– |
– |
|
КП С4, мкл |
– |
– |
– |
– |
– |
20 |
– |
– |
– |
|
КП С5, мкл |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
20 |
– |
– |
|
КС, мкл |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
20 |
– |
|
СХ, мкл |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
20 |
|
Инкубация №1 |
(37±1) °С, термостатируемый шейкер, 1 ч 30 мин либо (37±1) °С, термостат, 2 ч 15 мин |
||||||||
|
5-кратная промывка: раствором для промывания лунок иммуносорбента, мкл |
5× 300 |
5× 300 |
5× 300 |
5× 300 |
5× 300 |
5× 300 |
5× 300 |
5× 300 |
5× 300 |
|
Раствор ТМБ, мкл |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
Инкубация №2 |
(18-25)° С, (15-30) мин, либо (37±1) °С, термостат, 10 мин место, защищенное от света |
||||||||
|
Стоп-реагент, мкл |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
Перемешивание |
(18-25) °С, шейкер, (1-2) мин |
||||||||
|
Измерение ОП растворов в лунках стрипов, ОЕ |
Спектрофотометр, 450 нм |
||||||||
|
Расчет результатов |
Калькулятор и масштабная бумага либо соответствующая компьютерная программа |
||||||||
|
Примечания 1 КП – калибровочная проба; 2 КС – контрольная сыворотка; 3 СХ – анализируемые пробы. |
|||||||||
9.1 Если программа фотометра позволяет вычитать среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках А1 и А2 из значений ОП растворов всех остальных лунок, то для дальнейших расчетов необходимо использовать величину В — среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках, содержащих калибровочные или исследуемые пробы образцов сыворотки крови, ОЕ.
Если программа фотометра не позволяет вычитать среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках А1 и А2, то необходимо пользоваться формулой В–BТ, где ВТ — среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках А1 и А2, ОЕ; В — среднее значение ОП растворов в лунках, содержащих калибровочные или исследуемые пробы образцов сыворотки крови, ОЕ.
Примечание - Среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках А1 и А2 не должно превышать 0,09 ОЕ.
9.2 Рассчитать величину В, ОЕ, для каждой пары лунок, содержащих калибровочные пробы, контрольную сыворотку, пробы исследуемых образцов сыворотки крови.
9.3 В линейных координатах построить для калибровочных проб график зависимости величины В, ОЕ, от концентрации IgE в калибровочных пробах, МЕ/мл, откладывая на оси ординат значения ОП, ОЕ, а по оси абсцисс – значения концентраций IgE, МЕ/мл, в соответствующих калибровочных пробах (Рис. 2).
Внимание! Запрещается использовать для оценки реальных экспериментальных данных!
9.4 Определить по калибровочному графику концентрацию IgE в пробах исследуемых образцов сыворотки крови, МЕ/мл. В случае дополнительного разведения образцов сыворотки крови необходимо измеренную концентрацию IgE умножить на фактор разведения.
Примечание – В наборе «ИФА – общий IgE» значения концентраций калибровочных проб выражены в МЕ/мл. Для пересчета концентраций в нг/мл необходимо значение концентрации в МЕ/мл умножить на 2,4.
|
ОП при 450 нм |
|
|
Концентрация IgE, МЕ/мл |
Рисунок 2. Типичный калибровочный график
9.5 Экстраполяция калибровочного графика для значений концентрации IgE, превышающих значение концентрации калибровочной пробы С5, не допускается. Для точного определения значения концентрации в таких образцах необходимо выполнить их разведение в соответствии с п 6.7.
10.1 Специфичность. Не обнаружено перекрестной реакции моноклональных анти-IgE-антител с IgG, IgM, IgA.
10.2 Коэффициент вариации результатов определения IgE в одном и том же образце сыворотки крови с использованием набора «ИФА-общий IgE» не превышает 8 %.
10.3 Линейность. Зависимость концентрации IgE в образцах сыворотки крови при разведении их РР-С имеет линейный характер в диапазоне концентраций калибровочных проб С1-С5, МЕ/мл и составляет ± 10%.
Примечание – Так как содержащиеся в сыворотке крови человека антитела имеют гетерогенную природу, при разведении исследуемых образцов зависимость определяемой концентрации IgE от степени разведения в отдельных случаях может носить нелинейный характер.
10.4 Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» IgE – отношение измеренной к расчетной концентрации IgE в пробе, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы С2. Процент открытия составляет (90–110) %.
10.5 Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концентрация IgE в сыворотке крови человека не превышает 2,3 МЕ/мл.
10.6 Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, основанных на «сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита зависимость величины ОП от концентрации становится обратно пропорциональной (так называемый хук-эффект высоких концентраций). При использовании набора «ИФА-общий IgE» хук-эффект не обнаружен вплоть до концентрации IgE 10 000 МЕ/мл.
10.7 Диапазон ожидаемых значений. Содержание общего IgE измеряли в сыворотке крови, взятой с 9 до 11 ч, у 79 здоровых лиц и 226 больных, страдающих различными аллергическими заболеваниями, в возрасте 21–45 лет. У 48 % здоровых лиц концентрация общего IgE была ниже 25 МЕ/мл, у 34 % – от 25 до 100 МЕ/мл, у 18 % – более 100 МЕ/мл. У 8 % больных, страдающих аллергическими заболеваниями, концентрация общего IgE была ниже 25 МЕ/мл, у 22 % – от 25 до 100 МЕ/мл, у 70 % – более 100 МЕ/мл.
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности метода, особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изготовителем значения только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определены диапазоны ожидаемых значений, характерных для конкретной популяции в месте расположения лаборатории.
10.8 В наборе «ИФА-общий IgE» значения концентраций калибровочных проб выражены в МЕ/мл. Для пересчета концентраций общего IgE в нг/мл необходимо значение концентрации в МЕ/мл умножить на 2,4.
11.1 Набор выпускается в двух вариантах комплектации:
1 комплект 1 – проведение анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной пробы для измерения значения ОП раствора ТМБ. Набор рассчитан на 4 постановки ИФА: 1 постановка – 3 стрипа (24 лунки). Всего – 96 определений;
2 комплект 2 – для проведения анализа на автоматическом анализаторе открытого типа. Набор рассчитан на проведение анализа в монопликатах 88 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной пробы для измерения значения ОП раствора ТМБ. Набор рассчитан на 6 постановок иммуноферментного анализа: 1 постановка – 2 стрипа (16 лунок). Всего – 96 определений.
12.1 Хранение набора должно производиться в упаковке предприятия-изготовителя в чистом, защищенном от влаги и света помещении при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до 25 °С не более 5 суток.
Запрещается замораживать компоненты набора.
12.2 Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
12.3 Срок годности набора – 12 месяцев.
Приложение А
|
[1]
|
Санитарные правила СП 17-129 РБ 2000 «Безопасность работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности и гельминтами», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 27.07.2000 г. № 40 |
|
[2]
|
Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 16.12.1998 г. № 351 О пересмотре ведомственных нормативных актов, регламентирующих вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД |
|
[3]
|
Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 25.11.2002 г. № 165 О проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями здравоохранения |
|
[4]
|
Постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 28.04.2010 г. № 47 Об утверждении Инструкции о порядке проведения обязательных медицинских осмотров работающих и признании утратившими силу некоторых постановлений Министерства здравоохранения Республики Беларусь |
|
[5]
|
Санитарные нормы и правила СанПиН № 2.1.7.14-20-2005 «Правила обращения с медицинскими отходами» |
СП ООО «Фармлэнд» Почтовый адрес: 220113 г. Минск, ул. Восточная, 129. Тел\факс (017) 2621417.
По вопросам применения и качества набора обращаться на предприятие-изготовитель СП ООО «Фармлэнд».