Назначение набора
Набор предназначен для выявления антител класса G к вирусу простого герпеса первого и второго типов (ВПГ-I/II) в сыворотке или плазме крови человека “in vitro” методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа.
2.1 Состав набора:
Наименование компонента |
Количество |
Иммуносорбент |
1 планшет |
Положительный контрольный образец (К+) |
1 флакон, 1,5 мл |
Отрицательный контрольный образец (К–) |
1 флакон, 3,0 мл |
Раствор для разведения сывороток (РР-С) |
1 флакон, 11,0 мл |
Раствор конъюгата (РК) |
1 флакон, 11,0 мл |
Буферный раствор для субстрата (БРС) |
1 флакон, 13,0 мл |
Хромоген ТМБ |
1 флакон, 0,5 мл |
25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т×25) |
1 флакон, 28,0 мл |
Стоп-реагент |
1 флакон, 6,0 мл |
Комплект ванночек для реагентов с наконечниками для многоканальных пипеток |
1 комплект |
Клейкая пленка |
3 штуки |
2.2 Основные компоненты набора «ИФА-ВПГ-I/II IgG» – иммуносорбент и конъюгат.
Иммуносорбент представляет собой разборный полистироловый планшет, в лунках которого сорбирована смесь рекомбинантных антигенов ВПГ-I/II.
Конъюгат представляет собой моноклональные антитела мыши к IgG человека, конъюгированные с пероксидазой хрена.
Положительный контрольный образец – сыворотка крови человека, содержащая антитела класса G к ВПГ-I/II и не содержащая антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С и Treponema pallidum и HВs-антиген, инактивированная прогреванием при температуре 56 °С в течение 3 ч.
Отрицательный контрольный образец – сыворотка крови человека, не содержащая антитела к ВПГ-I/II, ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, Treponema pallidum и HВs-антиген, инактивированная прогреванием при температуре 56 °С в течение 3 ч.
Принцип работы набора. При внесении в лунки планшета иммуносорбента образцов сыворотки (плазмы) инфицированной крови человека специфические антитела к ВПГ-I/II связываются с антигенами ВПГ-I/II, сорбированными на поверхности лунок планшета иммуносорбента, образуя иммунные комплексы «антиген–антитело». Образовавшиеся комплексы «антиген–антитело» выявляют при помощи иммуноферментного конъюгата. После отмывания несвязавшихся компонентов комплекс «антиген–антитело класса G–конъюгат» выявляют, добавляя в лунки планшета раствор субстрата пероксидазы (перекись водорода) и хромогена (ТМБ). При этом в лунках, содержащих специфические антитела класса G к ВПГ-I/II, происходит изменение окраски раствора. В лунках, не содержащих специфические антитела класса G к ВПГ-I/II, изменение окраски раствора не произойдет.
Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя стоп-реагент (0,9 М раствор серной кислоты). Интенсивность окрашивания раствора в лунках измеряют на спектрофотометре как величину оптической плотности (ОП), ОЕ, при длине волны 450 нм.
Величина ОП прямо пропорциональна концентрации специфических антител, содержащихся в образце сыворотки (плазмы) крови человека. Чем выше содержание антител класса G к ВПГ-I/II в образце, тем выше интенсивность окрашивания раствора.
2.3 Набор рассчитан на проведение 12 постановок ИФА: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 96 определений, включая контрольные образцы.
Продолжительность анализа составляет 45 мин.
3.1 Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. Однако работа со всеми исследуемыми образцами сыворотки (плазмы) крови человека, которые следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции, с отработанными растворами и жидкостями, различным оборудованием, которое может быть загрязнено в процессе анализа, требует определенных мер безопасности при использовании набора:
- работу необходимо проводить в специально оборудованном помещении;
- работать необходимо с применением средств индивидуальной защиты и с соблюдением мер предосторожности в соответствии с требованиями [1], [2], и [3].
3.2 Стоп-реагент, содержащий серную кислоту, обладает раздражающим действием. При попадании на кожу и слизистые немедленно промыть большим количеством воды.
3.3 При работе с набором рабочие места должны быть обеспечены приточно-вытяжной вентиляцией.
3.4 Все лица, работающие в лаборатории с наборами, должны проходить обязательный медицинский осмотр в соответствии с требованиями [4].
3.5 Утилизация медицинских отходов и/или неиспользованных наборов с истекшим сроком годности должна производиться в соответствии с требованиями [5].
4.1 Для исключения ложных результатов исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови человека необходимо готовить и хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Необходимо осветлять образцы сыворотки крови человека, содержащие агрегированные компоненты сыворотки или осадок, при помощи центрифугирования в течение 15 мин при скорости вращения 3000 об/мин. Образцы сыворотки крови человека можно хранить при температуре (2-8) °С не более 7 суток. Замороженные образцы (желательно до температуры минус 20 °С и ниже) можно хранить не более 6 месяцев. Допускается замораживание образца не более двух раз, поэтому следует избегать повторных циклов замораживания-оттаивания образцов за счет оперативности проведения анализа.
Необходимо помнить, что образцы с гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным проростом, а также длительно хранившиеся без замораживания не пригодны для анализа.
Надежность результатов зависит от выполнения следующих правил:
- не допускается использование набора после окончания срока годности, а также смешивание компонентов наборов разных серий;
- для приготовления каждого реагента должна использоваться отдельная емкость;
- всю используемую для приготовления реагентов посуду нельзя обрабатывать дезрастворами и моющими средствами. В случае необходимости промыть водой питьевой проточной, а затем пять раз ополоснуть дистиллированной водой;
- для работы с хромогеном ТМБ необходимо использовать отдельные емкости для растворов и наконечники для пипеток;
- необходимо обратить внимание на тщательное перемешивание реагентов;
- время между заполнением и опорожнением лунок планшета растворами и реагентами должно быть не менее 30 с. Не допускается подсыхание лунок на всех этапах постановки ИФА;
- при использовании промывателя необходимо следить за состоянием емкости для раствора для промывания планшета и соединительных шлангов: в них не должно быть признаков бактериального или грибкового роста;
- необходимо использовать пипетки автоматические со сменными наконечниками, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);
- дозаторы и рабочие поверхности обрабатывать раствором с объемной долей спирта этилового 70 %. Не использовать хлорамин и другие хлорсодержащие вещества;
- для работы с образцами исследуемой сыворотки (плазмы) крови человека и контрольными образцами рекомендуется использовать одноразовые наконечники для пипеток. Каждый образец сыворотки (плазмы) крови человека, а также реагенты набора необходимо отбирать отдельным наконечником;
- во время проведения анализа следует избегать попадания прямых солнечных лучей на рабочую поверхность.
5.1 Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов в лунках планшета при длине волны от 450 нм до 700 нм;
- полу- или автоматическое устройство для промывания планшетов (вошер);
- суховоздушный термостат типа ТС-80 М2, поддерживающий температуру (37±1) °С, или аналогичный ему по характеристикам;
- пипетки одноканальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,01 до 5,0 мл;
- пипетки 8-ми канальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости до 0,5 мл;
- мерный цилиндр вместимостью 1000 мл;
- флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;
- ванночки для реагентов или чашки Петри (диаметр 100 мм);
- вата медицинская гигроскопическая;
- бумага фильтровальная;
- перчатки резиновые хирургические;
- раствор с объемной долей этилового спирта 70 %;
- раствор с массовой долей перекиси водорода 6 %;
- вода деионизированная или дистиллированная;
- контейнер для сбора твердых отходов;
- контейнер для слива жидких отходов.
6.1 Набор реагентов перед проведением анализа извлечь из холодильника, открыть крышку коробки и выдержать компоненты набора при температуре (18-25) °С в течение 30 мин.
Все образцы сыворотки (плазмы) крови человека и реагенты набора перед проведением анализа необходимо тщательно перемешать.
Расход реагентов набора для постановки анализа, который определяется количеством используемых стрипов, приведен в таблице А.1 Приложения А.
6.2 Приготовление раствора для промывания планшета
Если флакон с ФСБ-Т×25 содержит осадок, его необходимо прогреть перед использованием при температуре (37±1) °С до полного растворения осадка.
Для приготовления раствора для промывания планшета содержимое флакона с ФСБ-Т×25 необходимо разбавить в 25 раз водой очищенной. Для этого в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл внести содержимое флакона с ФСБ-Т×25, затем добавить дистиллированной (деионизированной) воды до метки 700 мл и аккуратно перемешать раствор, избегая образования пены.
В случае использования одного или несколько стрипов содержимое флакона с ФСБ-Т×25 интенсивно встряхнуть в течение (20-30) с, отобрать необходимый объем раствора (таблица А.1 Приложения А) в мерный стакан или цилиндр, добавить необходимое количество дистиллированной (деионизированной) воды и перемешать раствор.
Раствор для промывания планшета можно хранить при температуре (2-8) °С не более 7 сут.
Неиспользованный ФСБ-Т×25 можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
6.3 Подготовка иммуносорбента
Иммуносорбент готов к использованию.
Открыть пакет и установить на рамку необходимое количество стрипов. Неиспользованные стрипы хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре (2-8) °С не более 3 месяцев.
6.4 Подготовка К+, К–, РР-С, РК, БРС и стоп-реагента
К+, К–,РР-С, РК, БРС и стоп-реагент готовы к использованию.
Неиспользованные РР-С, РК, БРС и стоп-реагент после вскрытия флаконов можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
Остаток К+ и К- после вскрытия флаконов можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
6.5 Приготовление рабочего раствора субстрата
Если флакон с хромогеном ТМБ содержит кристаллы, его необходимо прогреть перед использованием в течение (3-5) мин при температуре (37±1) °С до полного растворения кристаллов!
Из флакона с хромогеном ТМБ отобрать указанный в таблице А.1 Приложения А объем и перенести во флакон с БРС. Содержимое флакона осторожно перемешать.
В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество БРС, добавить хромоген ТМБ в соответствии с таблицей А.1 Приложения А и осторожно перемешать раствор.
Внимание! Рабочий раствор субстрата готовить непосредственно перед использованием в защищенном от света месте! Раствор можно хранить не более 20 мин при температуре (18-25) °С в защищенном от света месте.
Раствор необходимо предохранять от попадания света и контакта с металлами или ионами металлов. Перед использованием раствор субстрата должен быть бесцветным. Посуду, которая будет в ходе реакции контактировать с раствором субстрата, отмывать без применения синтетических моющих средств. Необходимо использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники.
Остаток хромогена ТМБ можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
7.1 Для промывания планшета рекомендуется использовать автоматический или полуавтоматический промыватель – вошер; в случае отсутствия вошера можно промывать лунки 8-канальной пипеткой;
- на всех этапах промывания необходимо контролировать заполнение всех лунок и полное удаление (аспирацию) жидкости из них;
- необходимо при каждом промывании все лунки заполнить раствором до краев (0,30-0,35 мл в лунку), без переполнения и перетекания жидкости из соседних лунок;
- необходимо выдерживать лунки, заполненными раствором для промывания планшета, в течение 30 с;
- при каждой аспирации тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамкой со стрипами в перевернутом положении по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена;
- некачественное промывание планшета приводит к получению некорректных результатов.
8.1 В лунки иммуносорбента внести контрольные образцы. Схема внесения контрольных образцов в лунки иммуносорбента при постановке анализа:
а) при постановке ИФА на полном планшете иммуносорбента или на двух и более стрипах: в любые две лунки иммуносорбента внести по 0,1 мл (100 мкл) К+, в три другие лунки иммуносорбента внести по 0,1 мл (100 мкл) К–;
б) при постановке ИФА на одном стрипе в любую одну лунку иммуносорбента внести 0,1 мл (100 мкл) К+, в две другие лунки иммуносорбента внести по 0,1 мл (100 мкл) К–;
8.2 В остальные лунки иммуносорбента внести по 0,09 мл (90 мкл) РР-С, затем внести по 0,01 мл (10 мкл) проб образцов исследуемой сыворотки (плазмы) крови человека (конечное разведение исследуемых образцов – 1:10). Раствор в каждой лунке перемешать пять раз пипетированием, при этом во время пипетирования цвет РР-С должен измениться с фиолетового на голубой!
Внимание! Общее время внесения в лунки иммуносорбента контрольных и исследуемых образцов не должно превышать 5 мин! Каждый образец необходимо отбирать одноразовым наконечником!
8.3 Планшет иммуносорбента заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в течение 20 мин.
8.4 Удалить содержимое лунок иммуносорбента с помощью промывателя, затем промыть лунки иммуносорбента раствором для промывания планшета (п 6.2) пять раз. Для этого необходимо внести во все лунки по (0,30-0,35) мл раствора, а затем удалить содержимое лунок иммуносорбента в емкость с дезраствором. По окончании промывания тщательно удалить остатки жидкости из лунок, постукивая планшетом иммуносорбента в перевернутом положении (лунками вниз) по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена.
8.5 Во все лунки иммуносорбента внести по 0,1 мл (100 мкл) РК. РК перед внесением в лунки иммуносорбента перелить из флакона в прилагаемую к набору пластиковую ванночку.
Внимание! Время внесения РК в лунки иммуносорбента не должно превышать 5 мин! РК необходимо вносить в лунки иммуносорбента с использованием одноразовых наконечников, прилагаемых к набору!
8.6 Планшет иммуносорбента заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в течение 10 мин.
8.7 Удалить содержимое лунок иммуносорбента с помощью промывателя, затем промыть лунки иммуносорбента раствором для промывания планшета (п 6.2) пять раз.
8.8 Во все лунки иммуносорбента внести по 0,1 мл (100 мкл) рабочего раствора субстрата (п 6.5). Рабочий раствор субстрата перед внесением в лунки иммуносорбента перелить из флакона в прилагаемую к набору пластиковую ванночку.
Внимание! Рабочий раствор субстрата необходимо вносить в лунки иммуносорбента с использованием одноразовых наконечников, прилагаемых к набору!
8.9 Планшет иммуносорбента инкубировать при температуре (37±1) °С в защищенном от света месте в течение 15 мин.
Внимание! По окончании инкубации в лунках иммуносорбента с образцами сывороток, содержащими антитела класса G к ВПГ-I/II, произойдет изменение окраски раствора от бесцветной до голубой различной интенсивности в зависимости от концентрации антител.
8.10 Остановить пероксидазную реакцию путем внесения во все лунки иммуносорбента по 0,05 мл (50 мкл) стоп-реагента.
Внимание! В лунках иммуносорбента с образцами сывороток, содержащими антитела класса G к ВПГ-I/II, произойдет изменение окраски раствора с голубой на желтую различной интенсивности в зависимости от концентрации антител.
8.11 Не позже чем через 10 мин после остановки реакции определить значения ОП, ОЕ, в лунках иммуносорбента в двухволновом режиме – 450 нм относительно (620-700) нм. Как исключение, ОП, ОЕ, можно определять в одноволновом режиме при длине волны 450 нм.
9.1 Рассчитать среднее значение ОП для лунок с К- (ОПср К-), ОЕ, и для лунок с К+ (ОПср К+).
9.2 Результаты учитывать только в том случае если:
- значение ОПср К+ – не менее 0,600 ОЕ;
- значение ОПср К- – не более 0,200 ОЕ;
Каждое отдельное значение ОП К- не должно отклоняться от значения ОПср К- более чем на 20 %. Если одно из трех значений ОП К- выходит за этот предел, его следует исключить из расчета среднего значения. Если исключению подлежит более одного значения ОП К-, анализ следует повторить.
9.3 Качественное определение антител класса G к ВПГ-I/II
9.3.1 При соблюдении выше перечисленных условий вычислить критическое значение (ОПкрит.), ОЕ, по формуле (1):
ОПкрит. = ОПср К-+ 0,20 (1).
Результат анализа на данном наборе реагентов считать отрицательным, если значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека, ОЕ, меньше значения 0,9×ОПкрит.
Результат анализа на данном наборе реагентов считать положительным, если значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека, ОЕ, больше значения 1,1×ОПкрит.
Если значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека, ОЕ, находится в интервале от 0,9×ОПкрит. до 1,1×ОПкрит. («сомнительный результат»), то это означает, что образец содержит специфические антитела ниже достоверно определяемого уровня.
9.4 Полуколичественное определение содержание антител класса G к ВПГ-I/II
9.4.1 Для образца сыворотки (плазмы) крови человека, давшей положительный результат, определить титр антител. Титрование выявленного положительного образца провести следующим образом:
1) установить на рамку 1 стрип для внесения контрольных образцов + по одному стрипу для титрования каждого положительного образца;
2) в соответствии с п 8.1.а;
3) для исследования образца в верхнюю лунку стрипа иммуносорбента внести 0,18 мл (180 мкл) РР-С, затем внести 0,02 мл (20 мкл) образца исследуемой сыворотки (плазмы) крови человека (конечное разведение исследуемого образца – 1:10). Раствор в лунке перемешать пять раз пипетированием, при этом во время пипетирования цвет РР-С должен измениться!
4) в остальные лунки этого стрипа иммуносорбента внести по 0,1 мл (100 мкл) РР-С;
5) в остальных лунках этого стрипа раститровать полученное разведение исследуемого образца 1:10 с двукратным шагом. Для этого отобрать 0,1 мл (100 мкл) раствора из верхней лунки этого стрипа иммуносорбента и перенести во вторую лунку этого стрипа; перемешать раствор в лунке пять раз пипетированием. Затем отобрать из второй лунки этого стрипа иммуносорбента 0,1 мл (100 мкл) раствора, перенести в третью и т.д. до последней лунки этого стрипа. Для получения необходимого объема реакционной смеси удалить из последней лунки стрипа иммуносорбента 0,1 мл (100 мкл) раствора и вылить его в емкость с дезраствором. Таким образом, получают последовательные 2-кратные разведения образца от 1:10 до 1:1280.
6) В соответствии с пп 8.3-8.11.
Титром образца считается последнее разведение образца исследуемой сыворотки (плазмы) крови человека, при котором значение ОП, ОЕ, выше ОПкрит.
Внимание! При использовании другой серии набора реагентов повторно взятый образец сыворотки (плазмы) крови человека необходимо анализировать одновременно с предыдущим («парные» сыворотки), что позволяет с большей достоверностью оценить динамику титра специфических антител.
Результаты серологического теста могут быть использованы для постановки диагноза только в совокупности, с учетом всех лабораторных и клинических данных.
10.1 Положительный результат свидетельствует об инфекции, перенесенной в прошлом, или об острой стадии герпетической инфекции. Лабораторный диагноз острой стадии инфекции возможен при исследовании образца на авидность антител класса G к ВПГ-1 и ВПГ-2, либо при тестировании в одной постановке «парных» образцов, взятых от пациента с интервалом 2 недели. Увеличение титра в два и более раз свидетельствует об острой инфекции.
10.2 Отрицательный результат подразумевает отсутствие инфицирования либо раннюю стадию первичной герпетической инфекции (до начала продукции специфических антител класса G). Подтверждение ранней стадии первичной инфекции возможно при исследовании образца на наличие антител класса М к ВПГ-1 и ВПГ-2.
10.3 Сомнительный результат свидетельствует о подозрении на начало острой стадии герпетической инфекции. лабораторный диагноз возможен при исследовании образца на наличие антител класса М к ВПГ-1 и ВПГ-2 либо при тестировании в одной постановке «парных» образцов, взятых от пациента с интервалом 2 недели. Увеличение титра в два и более раз свидетельствует об острой инфекции.
При повторном получении сомнительного результата образец следует исследовать другими методами.
Проведенный анализ может быть сомнительным у пациентов, страдающих различными иммунодефицитами, или прошедших процедуру переливания крови, или получавших препараты крови в течение (2-3) месяцев.
11.1 Набор поставляется в двух вариантах комплектации:
1 комплект 1 – для проведения анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 12 постановок ИФА на разборном планшете: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 96 определений, включая контрольные образцы;
2 комплект 2 – для проведения анализа на автоматическом анализаторе. Набор рассчитан на проведение 12 постановок ИФА на разборном планшете: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 96 определений, включая контрольные образцы.
12.1 Хранение набора должно производиться в чистом, защищенном от влаги и света помещении при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности.
Запрещается замораживать компоненты набора.
12.2 Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
12.3 Срок годности набора – 12 месяцев.
Таблица А.1 – Расход реагентов набора для постановки ИФА
Объем реагента, мл |
Количество используемых стрипов, шт. |
|||||||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
Приготовление раствора для промывания планшета |
||||||||||||
ФСБ-Т×25 |
2,0 |
4,0 |
6,0 |
8,0 |
10, |
12,0 |
14,0 |
16,0 |
18,0 |
20,0 |
22,0 |
28,0 |
Дистиллированная вода |
до 50 |
до 100 |
до 150 |
до 200 |
до 250 |
до 300 |
до 350 |
до 400 |
до 450 |
до 500 |
до 550 |
до 700 |
Приготовление рабочего раствора субстрата |
||||||||||||
БРС |
1,08 |
2,16 |
3,24 |
4,32 |
5,40 |
6,48 |
7,56 |
8,64 |
9,72 |
10,80 |
11,88 |
13,0 |
Хромоген ТМБ |
0,033 |
0,066 |
0,099 |
0,132 |
0,165 |
0,198 |
0,231 |
0,264 |
0,297 |
0,330 |
0,363 |
0,400 |
[1]
|
Санитарные правила СП 17-129 РБ 2000 «Безопасность работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности и гельминтами», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 27.07.2000 г. № 40 |
[2]
|
Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 16.12.1998 г. № 351 О пересмотре ведомственных нормативных актов, регламентирующих вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД |
[3]
|
Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 25.11.2002 г. № 165 О проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями здравоохранения |
[4] |
Постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 28.04.2010 г. № 47 Об утверждении Инструкции о порядке проведения обязательных медицинских осмотров работающих и признании утратившими силу некоторых постановлений Министерства здравоохранения Республики Беларусь |
[5] |
Санитарные нормы и правила СанПиН № 2.1.7.14-20-2005 «Правила обращения с медицинскими отходами» |
СП ООО «Фармлэнд» Почтовый адрес:220113 г. Минск, ул. Восточная, 129. Тел\факс (017) 2621417.
По вопросам применения и качества набора обращаться на предприятие-изготовитель СП ООО «Фармлэнд».