ИФА-Токсо-IgG

Вы здесь

ИФА-Токсо-IgG

Торговое наименование: 
ИФА-Токсо-IgG
Международное наименование: 
ИФА-Токсо-IgG
Категория: ИФА тест-системы
Назначение: Для диагностики TORCH-инфекций

Описание

1  Назначение набора

1.1  Набор предназначен для качественного и количественного определения содержания  антител класса G к Toxoplasma gondii в сыворотке или плазме крови человека “in vitro” методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа.

 

2  Характеристика и принцип работы набора

2.1  Состав набора:

Наименование компонента

Количество

Иммуносорбент

1 планшет

Положительный контрольный образец (К+)

1 флакон, 3,0 мл

Отрицательный контрольный образец (К)

1 флакон, 3,0 мл

Конъюгат (Кг)

1 флакон, 0,6 мл

Раствор для разведения сывороток (РР-С)

1 флакон, 11,0 мл

Раствор для разведения конъюгата (РР-К)

1 флакон, 13,0 мл

Буферный раствор для субстрата (БРС)

1 флакон, 13,0 мл

Хромоген ТМБ

1 флакон, 0,5 мл

25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т×25)

1 флакон, 28,0 мл

Стоп-реагент

1 флакон, 6,0 мл

Комплект ванночек для реагентов с наконечниками для многоканальных пипеток

1 комплект

Клейкая пленка

3 штуки

 

2.2  Основные компоненты набора «ИФА-Токсо-IgG» – иммуносорбент и конъюгат.

Иммуносорбент представляет собой разборный полистироловый планшет, в лунках которого сорбирован полноразмерный рекомбинантный антиген Sag I Toxoplasma gondii.

Конъюгат представляет собой моноклональные антитела мыши к IgG человека, конъюгированные с пероксидазой хрена.

Положительный контрольный образец – сыворотка крови человека, содержащая антитела класса G к Toxoplasma gondii с известным значением концентрации, МЕ/мл, и не содержащая антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С и Treponema pallidum и HВs-антиген, инактивированная прогреванием при температуре 56 °С в течение 3 ч.

Отрицательный контрольный образец – сыворотка крови человека, не содержащая антитела к Toxoplasma gondii, ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, Treponema pallidum и HВs-антиген, инактивированная прогреванием при температуре                56 °С в течение 3 ч.

Принцип работы набора. При внесении в лунки планшета образцов сыворотки (плазмы) инфицированной крови человека специфические антитела к Toxoplasma gondii связываются с антигеном Toxoplasma gondii, сорбированном на поверхности лунок планшета иммуносорбента, образуя иммунные комплексы «антиген–антитело». Образовавшиеся комплексы выявляют при помощи иммуноферментного конъюгата. После отмывания несвязавшихся компонентов комплекс «антиген–антитело класса G–конъюгат» выявляют, добавляя в лунки планшета раствор субстрата пероксидазы (перекись водорода) и хромогена (ТМБ) При этом в лунках, содержащих специфические антитела класса G к Toxoplasma gondii, происходит изменение окраски раствора. В лунках, не содержащих специфические антитела класса G к Toxoplasma gondii, изменение окраски раствора не произойдет.

Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя стоп-реагент (0,9 М раствор серной кислоты). Интенсивность окрашивания раствора в лунках измеряют на спектрофотометре как величину оптической плотности (ОП), ОЕ, при длине волны  450 нм.

Величина ОП прямо пропорциональна концентрации специфических антител, содержащихся в образце сыворотки (плазмы) крови человека. Чем выше содержание антител класса G к Toxoplasma gondii в образце, тем выше интенсивность окрашивания раствора.

Формула количественного расчета специфической активности исследуемых образцов сыворотки (плазмы) инфицированной крови человека основана на статистическом методе приближения по двум точкам (ОПкрит. и ОПср К+) эмпирической кривой графика зависимости оптической плотности от специфической активности, которая получена при аттестации серии набора. формула зависимости рекомендована Комитетом по Биостандартизации ВОЗ. В качестве эталона используется К+, который аттестован относительно международного стандарта ВОЗ человеческого иммуноглобулина против Toxoplasma gondii (NIBSC code: 01/600) с использованием программы статистической обработки результатов ИФА «Paraline v.3.0».

2.3  Набор рассчитан на проведение 12 постановок ИФА: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 96 определений, включая контрольные образцы.

Продолжительность анализа составляет 1 ч 20 мин.

3  Меры предосторожности при работе с набором

3.1  Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. Однако работа со всеми исследуемыми образцами сыворотки (плазмы) крови человека, которые следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции, с отработанными растворами и жидкостями, различным оборудованием, которое может быть загрязнено в процессе анализа, требует определенных мер безопасности при использовании набора:

- работу необходимо проводить в специально оборудованном помещении;

- работать необходимо с применением средств индивидуальной защиты и с соблюдением мер предосторожности в соответствии с требованиями [1], [2], и [3].

3.2  Стоп-реагент, содержащий серную кислоту, обладает раздражающим действием. При попадании на кожу и слизистые немедленно промыть большим количеством воды.

3.3  При работе с набором рабочие места должны быть обеспечены приточно-вытяжной вентиляцией.

3.4  Все лица, работающие в лаборатории с наборами, должны проходить обязательный медицинский осмотр в соответствии с требованиями [4].

3.5  Утилизация медицинских отходов и/или неиспользованных наборов с истекшим сроком годности должна производиться в соответствии с требованиями [5].

 

4  Правила работы с набором

4.1  Для исключения ложных результатов исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови человека необходимо готовить и хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Необходимо осветлять образцы сыворотки крови человека, содержащие агрегированные компоненты сыворотки или осадок, при помощи центрифугирования в течение                 15 мин при скорости вращения 3000 об/мин. Образцы сыворотки крови человека можно хранить при температуре (2-8) °С не более 7 суток. Замороженные образцы (желательно до температуры минус 20 °С и ниже) можно хранить не более 6 месяцев. Необходимо избегать повторных циклов замораживания-оттаивания образцов.

Необходимо помнить, что образцы с гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным проростом, а также длительно хранившиеся без замораживания не пригодны для анализа.

Надежность результатов зависит от выполнения следующих правил:

- не допускается использование набора после окончания срока годности, а также смешивание компонентов наборов разных серий;

- для приготовления каждого реагента должна использоваться отдельная емкость;

- всю используемую для приготовления реагентов посуду нельзя обрабатывать дезрастворами и моющими средствами. В случае необходимости промыть водой питьевой проточной, а затем пять раз ополоснуть дистиллированной водой;

- для работы с хромогеном ТМБ и РХ необходимо использовать отдельные емкости для растворов и наконечники для пипеток;

- необходимо обратить внимание на тщательное перемешивание реагентов;

- время между заполнением и опорожнением лунок планшета растворами и реагентами должно быть не менее 30 с. Не допускается подсыхание лунок на всех этапах постановки ИФА;

- при использовании промывателя необходимо следить за состоянием емкости для раствора для промывания планшета и соединительных шлангов: в них не должно быть признаков бактериального или грибкового роста;

- необходимо использовать пипетки автоматические со сменными наконечниками, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);

- дозаторы и рабочие поверхности обрабатывать раствором с объемной долей спирта этилового 70 %. Не использовать хлорамин и другие хлорсодержащие вещества;

- для работы с образцами исследуемой сыворотки (плазмы) крови человека и контрольными образцами рекомендуется использовать одноразовые наконечники для пипеток. Каждый образец сыворотки (плазмы) крови человека, а также реагенты набора необходимо отбирать отдельным наконечником;

- при внесении в лунки раствора Кг в рабочем разведении нельзя касаться наконечником пипетки поверхности планшета;

- во время проведения анализа следует избегать попадания прямых солнечных лучей на рабочую поверхность.

 

5  Оборудование и материалы, необходимые для проведения анализа

5.1  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов в лунках планшета при длине волны от 450 нм до 700 нм;

- полу- или автоматическое устройство для промывания планшетов (вошер);

- суховоздушный термостат типа ТС-80 М2, поддерживающий температуру (37±1) °С, или аналогичный ему по характеристикам;

- пипетки одноканальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,01 до 5,0 мл;

- пипетки 8-ми канальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости до 0,5 мл;

- мерный цилиндр вместимостью 1000 мл;

- флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;

- ванночки для реагентов или чашки Петри (диаметр 100 мм);

- вата медицинская гигроскопическая;

- бумага фильтровальная;

- перчатки резиновые хирургические;

- раствор с объемной долей этилового спирта 70 %;

- раствор с массовой долей перекиси водорода 6 %;

- вода деионизированная или дистиллированная;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива жидких отходов.

 

6  Подготовка к проведению анализа

6.1  Набор реагентов перед проведением анализа извлечь из холодильника, открыть крышку коробки и выдержать компоненты набора при температуре (18-25) °С в течение 30 мин.

Все образцы сыворотки (плазмы) крови человека и реагенты набора перед проведением анализа необходимо тщательно перемешать.

Расход реагентов набора для постановки анализа, который определяется количеством используемых стрипов, приведен в таблице А.1 Приложения А.

6.2  Приготовление раствора для промывания планшета

Если флакон с ФСБ-Т×25 содержит осадок, его необходимо прогреть перед использованием при температуре (37±1) °С до полного растворения осадка.

Для приготовления раствора для промывания планшета содержимое флакона с ФСБ-Т×25 необходимо разбавить в 25 раз водой очищенной. Для этого в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл внести содержимое флакона с ФСБ-Т×25, затем добавить дистиллированной (деионизированной) воды до метки 700 мл и аккуратно перемешать раствор, избегая образования пены.

В случае использования одного или несколько стрипов содержимое флакона с ФСБ-Т×25 интенсивно встряхнуть в течение (20-30) с, отобрать необходимый объем раствора (таблица А.1 Приложения А) в мерный стакан или цилиндр, добавить необходимое количество дистиллированной (деионизированной) воды и перемешать раствор.

Раствор для промывания планшета можно хранить при температуре (2-8) °С не более 7 сут.

Неиспользованный ФСБ-Т×25 можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.3  Подготовка иммуносорбента

Иммуносорбент готов к использованию.

Открыть пакет и установить на рамку необходимое количество стрипов. Неиспользованные стрипы хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре (2-8) °С не более 3 месяцев.

6.4  Подготовка К+, К, РР-С, РР-К, БРС, и стоп-реагента

Иммуносорбент, К+, К, РР-С, РР-К, БРС и стоп-реагент готовы к использованию.

Внимание! Во флаконах с РР-С и РР-К возможно выпадение осадка. Перед использованием содержимое флаконов тщательно перемешать, не допуская образования пены.

Неиспользованные РР-С, РР-К, БРС и стоп-реагент после вскрытия флаконов можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

Остаток К+ и К- после вскрытия флаконов можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.5  Приготовление раствора Кг в рабочем разведении

Из флакона с Кг отобрать указанный в таблице А.1 Приложения А объем и перенести во флакон с РР-К. Содержимое флакона тщательно перемешать, не допуская образования пены.

В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество РР-К, добавить Кг в соответствии с таблицей А.1 Приложения А и перемешать раствор, не допуская образования пены.

Внимание! Раствор Кг в рабочем разведении готовить непосредственно перед использованием! Раствор Кг в рабочем разведении можно хранить не более 15 мин при температуре (18-25) °С. Необходимо использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники!

Остаток Кг можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.6  Приготовление рабочего раствора субстрата

Если флакон с хромогеном ТМБ содержит кристаллы, его необходимо прогреть перед использованием в течение                   (3-5) мин при температуре (37±1) °С до полного растворения кристаллов.

Из флакона с хромогеном ТМБ отобрать указанный в таблице А.1 Приложения А объем и перенести во флакон с БРС. Содержимое флакона осторожно перемешать.

В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество БРС, добавить хромоген ТМБ в соответствии с таблицей А.1 Приложения А и осторожно перемешать раствор.

Внимание! Рабочий раствор субстрата готовить непосредственно перед использованием в защищенном от света месте! Раствор можно хранить не более 20 мин при температуре (18-25) °С в защищенном от света месте.

Раствор необходимо предохранять от попадания света и контакта с металлами или ионами металлов. Перед использованием раствор субстрата должен быть бесцветным. Посуду, которая будет в ходе реакции контактировать с раствором субстрата, отмывать без применения синтетических моющих средств. Необходимо использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники.

Остаток хромогена ТМБ можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

 

7   Требования к промыванию планшета

7.1  Для промывания планшета рекомендуется использовать автоматический или полуавтоматический промыватель – вошер; в случае отсутствия вошера можно промывать лунки 8-канальной пипеткой;

- на всех этапах промывания необходимо контролировать заполнение всех лунок и полное удаление (аспирацию) жидкости из них;

- необходимо при каждом промывании все лунки заполнить раствором до краев (0,30-0,35 мл в лунку), без переполнения и перетекания жидкости из соседних лунок;

- необходимо выдерживать лунки, заполненными раствором для промывания планшета, в течение 30 с;

- при каждой аспирации тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамкой со стрипами в перевернутом положении по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена;

- некачественное промывание планшета приводит к получению некорректных результатов.

 

8  Проведение анализа

8.1  В лунку иммуносорбента А-1 и в две последние лунки в данной постановке анализа внести по 0,1 мл (100 мкл) К+; в лунки B1 и C-1 внести по 0,1 мл (100 мкл) К; в лунку D1 внести 0,1 мл (100 мкл) РР-С для контроля конъюгата (ККг).

Внимание! При постриповой постановке ИФА сохраняется порядок внесения контрольных образцов!

В остальные лунки внести по 0,09 мл (90 мкл) РР-С, затем внести по 0,01 мл (10 мкл) образцов исследуемой сыворотки (плазмы) крови человека конечное разведение исследуемых образцов – 1:10). Раствор в каждой лунке перемешать пять раз пипетированием, при этом во время пипетирования цвет РР-С должен измениться!

Внимание! Общее время внесения в лунки иммуносорбента контрольных и исследуемых образцов не должно превышать 10 мин! Каждый образец необходимо отбирать одноразовым наконечником!

Внимание! При необходимости допускается проведение оптического контроля точности внесения контрольных образцов, РР-С и исследуемых образцов в лунки иммуносорбента (п. 9.1).

8.2  Планшет иммуносорбента заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в течение 30 мин.

8.3  Удалить содержимое лунок иммуносорбента с помощью промывателя, затем промыть лунки иммуносорбента раствором для промывания планшета (п 6.2) пять раз. Для этого необходимо внести во все лунки по (0,30-0,35) мл раствора, а затем удалить содержимое лунок иммуносорбента в емкость с дезраствором. По окончании промывания тщательно удалить остатки жидкости из лунок, постукивая планшетом иммуносорбента в перевернутом положении (лунками вниз) по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена.

8.4  Во все лунки иммуносорбента внести по 0,1 мл (100 мкл) раствора Кг в рабочем разведении (п 6.5). Раствор Кг в рабочем разведении перед внесением в лунки иммуносорбента перелить из флакона в прилагаемую к набору пластиковую ванночку.

Внимание! Время внесения в лунки иммуносорбента раствора Кг в рабочем разведении не должно превышать 10 мин! Раствор Кг в рабочем разведении необходимо вносить в лунки иммуносорбента с использованием одноразовых наконечников, прилагаемых к набору!

Внимание! При необходимости допускается проведение оптического контроля точности внесения раствора Кг в рабочем разведении в лунки иммуносорбента (п. 9.1).

8.5  Планшет иммуносорбента заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в течение 30 мин.

8.6  Удалить содержимое лунок иммуносорбента с помощью промывателя, затем промыть лунки иммуносорбента раствором для промывания планшета (п 6.2) пять раз.

8.7  Во все лунки иммуносорбента внести по 0,1 мл (100 мкл) рабочего раствора субстрата (п 6.6).

Флакон с хромогеном ТМБ необходимо прогреть перед использованием при температуре (37±1) °С до полного растворения кристаллов. Рабочий раствор субстрата  перед внесением в лунки иммуносорбента перелить из флакона в прилагаемую к набору пластиковую ванночку.

Внимание! Рабочий раствор субстрата необходимо вносить в лунки иммуносорбента с использованием одноразовых наконечников, прилагаемых к набору!

8.8  Планшет  инкубировать (без пленки  и крышки) при температуре (20-25) °С в защищенном от света месте в течение 20 мин.

Внимание! По окончании инкубации в лунках иммуносорбента с образцами сывороток, содержащими антитела класса G к Toxoplasma gondii, произойдет изменение окраски раствора различной интенсивности в зависимости от концентрации антител: от бесцветной до голубой.

8.9  Остановить пероксидазную реакцию путем внесения во все лунки иммуносорбента по 0,05 мл (50 мкл) стоп-реагента.

Внимание! В лунках иммуносорбента с образцами сывороток, содержащими антитела класса G к Toxoplasma gondii, произойдет изменение окраски раствора различной интенсивности: с голубой (синей) на желтую.

8.10 Не позже чем через 10 мин после остановки реакции определить значения ОП, ОЕ, в лунках иммуносорбента: в двухволновом режиме – 450 нм относительно (620-700) нм  или в одноволновом режиме при длине волны 450 нм.

 

9  Обработка результатов анализа

9.1  Рассчитать среднее значение ОП для лунок с К- (ОПср К-), ОЕ.

9.2  Результаты учитывать только в том случае если:

- значение ОП в каждой из лунок с К+ (ОП К+) находиться в интервале от 0,400 до 2,800 ОЕ;

- значение ОПср К-менее 0,200 ОЕ;

- значение ОП в лунке с ККг (ОП ККг)менее 0,100 ОЕ;

9.3  Качественное определение антител класса G к Toxoplasma gondii

9.3.1  При соблюдении выше перечисленных условий вычислить критическое значение (ОПкрит.), ОЕ, по формуле (1):

 

ОПкрит. = ОПср К-+ 0,20                                                                               (1).

 

9.3.2  Рассчитать интервал области неопределенных значений («серая зона»). «Серая зона» – зона значений ОП, которая находится в интервале ОПкрит.±0,05.

Результат анализа считать отрицательным при анализе на данном наборе реагентов, если значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека меньше значения ОПкрит-0,05.

Результат анализа считать положительным при анализе на данном наборе реагентов, если значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека больше значения ОПкрит+0,05.

9.4  Количественное определение содержание антител класса G к Toxoplasma gondii

9.4.1  Для образцов сыворотки (плазмы) крови человека, давших положительный результат, вычислить концентрацию антител класса G к Toxoplasma gondii (С обр.), МЕ/мл.

Внимание! Если значение ОП, ОЕ, образца сыворотки (плазмы) крови человека, превышает 2,800 ОЕ, то для вычисления С обр., МЕ/мл, этот образец необходимо исследовать в более высоких конечных разведениях (1:20 или 1:40). Для этого образец сыворотки (плазмы) крови человека необходимо предварительно развести раствором для промывания планшета           (п 6.2) в 2 или 4 раза и далее исследовать как цельный образец сыворотки (плазмы) крови человека с последующим умножением конечного результата С обр. на 2 и 4 соответственно).

9.4.2  Количественное определение содержание антител класса G к Toxoplasma gondii можно провести, используя два варианта:

 

Вариант 1 (использование графика)

К набору прилагается график зависимости значений оптической плотности исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови человека после коррекции, (ОПкор.), ОЕ, от значений концентрации антител класса G к Toxoplasma gondii в исследуемых образцах сыворотки (плазмы) крови человека (С обр.), МЕ/мл, построенный при выходном контроле серии набора.

1) вычислить ОПкор., ОЕ, по формуле (2):

 

ОП обр. × ОПисх К+

ОПкор. =  --------------------------------                                                                (2),

ОПср К+

 

где ОП обр. – значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека, ОЕ;

ОПисх К+ – среднее значение ОП К+, полученное при выходном контроле серии набора (таблица А.2 Приложения А);

ОПср К+ - среднее значение ОП для лунок с К+ (ОПср К+), ОЕ.

2) Найти значение С обр., используя вышеуказанный график.

 

Вариант 2 (использование формулы или компьютерного алгоритма)

1) Вычисление С обр., МЕ/мл, провести в 2 этапа:

1 этап. Рассчитать значение промежуточного показателя (Пп) по формуле (3):

 

С К+

Пп = ОП обр. × ------------------------                                                               (3),

ОПср К+

 

где ОП обр. – значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека;

С К+ – значение концентрации антител класса G к Toxoplasma gondii в К+, МЕ/мл, полученное при выходном контроле серии набора (таблица А.2 Приложения А, указано на этикетке флакона с К+).

2 этап. Рассчитать значение С обр., МЕ/мл по формуле (4):

 

С обр. = 10(Пп – а):b                                                                                             (4),

 

где а и b – значения констант, полученные при выходном контроле серии набора (таблица А.2 Приложения А).

Пример расчета полученных данных приведен в таблице 1.

 

 

 

 

 

Таблица 1

 

ОП К+ – значение ОП в лунке А-1 и в двух последних лунках в данной постановке (например, H-12 и G-12), ОЕ

1,308; 1,402; 1,377; все значения более 0,400 и менее 2,800

ОП К- – значения ОП в лунках В-1 и С-1, ОЕ

0,041; 0,043; оба значения менее 0,200

ОП ККг – значение ОП в лунке D-1, ОЕ

0,051; значение менее 0,100

Вышеуказанные данные свидетельствуют о возможности учета результатов ИФА

ОПкрит., ОЕ

(0,041 + 0,043): 2 + 0,2 = 0,242

Верхняя граница «серой зоны», ОЕ

0,242 + 0,05 = 0,292

Нижняя граница «серой зоны», ОЕ

0,242 – 0,05 – 0,192

ОПср К+ – значения ОП в лунке А-1 и в двух последних лунках в данной постановке, ОЕ

(1,308 + 1,402 + 1,377): 3 = 1,362

С К+ – по таблице А.2 Приложения А (только для данного примера), МЕ/мл

58,65

ОП обр. – значение ОП исследуемого образца, ОЕ

1,639

Пп – значение, рассчитанное по формуле (3), МЕ/мл

1,639 × 58,65 : 1,362 = 70,58

а – значение константы по таблице А.2 Приложения А (только для данного примера)

-187

b – значение константы по таблице А.2 Приложения А (только для данного примера)

139

(Пп – а): b

(70,58 – (-187) : 139 = 1,85

С обр., МЕ/мл

101,85 = 70,8

 

2) Для упрощения процедуры вычисления значений концентрации антител класса G к Toxoplasma gondii в исследуемых образцах сыворотки (плазмы) крови человека рекомендуется пользоваться компьютерным алгоритмом, написанным по формулам (3) и (4). Компьютерный алгоритм можно запросить в Отделе изделий медицинского назначения СП ООО «Фармлэнд» по тел/факс (017) 2621417 или бесплатно скачать с сайта СП ООО «Фармлэнд» по адресу: http://www.pharmland.by.

 

10  Интерпретация результатов

10.1  Отрицательный результат качественного анализа свидетельствует об отсутствии антител класса G к Toxoplasma gondii. В случае отрицательного результата анализа у беременных женщин их следует отнести к группе риска по инфицированию возбудителем токсоплазмоза.

10.2  Положительный результат качественного анализа свидетельствует о наличии антител класса G к Toxoplasma gondii. Для исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови человека, давших положительный результат, необходимо вычислить концентрацию антител класса G к Toxoplasma gondii, МЕ/мл; также рекомендуется дополнительно исследовать эти образцы на наличие антител класса М и А к Toxoplasma gondii и определить индекс авидности антител класса G к Toxoplasma gondii.

10.3  Если концентрация антител класса G к Toxoplasma gondii в исследуемом образце сыворотки (плазмы) крови человека превышает 30 МЕ/мл, индекс авидности антител класса G к Toxoplasma gondii более 60 % и антитела класса М и А к Toxoplasma gondii отсутствуют, то вероятность острого иммунного ответа мала и риск реинфекции токсоплазмоза небольшой.

10.4  Если результат качественного анализа находится в области неопределенных значений («серой зоне») или концентрация антител класса G к Toxoplasma gondii в исследуемом образце сыворотки (плазмы) крови человека не превышает              30 МЕ/мл, рассчитанный индекс авидности антител класса G к Toxoplasma gondii не более 60 % и выявляются антитела класса М и А к Toxoplasma gondii, то существует риск недавно начавшейся инфекции или реинфекции. В этом случае требуется дополнительно исследовать новую порцию сыворотки (плазмы) от того же человека через (1-2) неделю для выявления динамики антителообразования и рекомендуется консультация врача-инфекциониста.

10.5  Результат проведенного анализа может быть недостоверным у пациентов, страдающих различными иммунодефицитами, или прошедших процедуру переливания крови, или получавших препараты крови в течение последних двух-трех месяцев.

 

11  Форма выпуска набора

11.1  Набор поставляется в двух вариантах комплектации:

комплект 1 – для проведения анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 12 постановок ИФА на разборном планшете: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 96 определений, включая контрольные образцы;

комплект 2 – для проведения анализа на автоматическом анализаторе. Набор рассчитан на проведение 12 постановок ИФА на разборном планшете: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 96 определений, включая контрольные образцы.

 

12  Условия хранения и применения набора

12.1  Хранение набора должно производиться в чистом, защищенном от влаги и света помещении при температуре                 (2-8) °С в течение всего срока годности.

Запрещается замораживать компоненты набора.

12.2  Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.

12.3  Срок годности набора – 12 месяцев.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Приложение А

 

Таблица А.1 – Расход реагентов набора для постановки ИФА

 

Объем

реагента, мл

Количество используемых стрипов, шт.

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

Приготовление раствора для промывания планшета

ФСБ-Т×25

2,0

4,0

6,0

8,0

10,

12,0

14,0

16,0

18,0

20,0

22,0

28,0

Дистиллированная

вода

до

50

до

100

до

150

до

200

до

250

до

300

до

350

до

400

до

450

до

500

до

550

до

700

Приготовление раствора Кг в рабочем разведении

РР-К

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

13,0

Кг

0,040

0,080

0,120

0,150

0,190

0,230

0,270

0,310

0,350

0,380

0,420

0,500

Приготовление рабочего раствора субстрата

БРС

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

13,0

Хромоген ТМБ

0,023

0,046

0,069

0,092

0,115

0,138

0,162

0,185

0,208

0,231

0,254

0,300

 

Таблица А.2 – Данные для вычисления специфической активности

 

ОПисх К+, ОЕ

2,342

С К+, МЕ/мл

130

а

-120

b

114

 

Библиография

 

[1]

 

Санитарные правила

СП 17-69 РБ 98 «Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 29.04.1998 № 18

[2]

 

Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 16.12.1998 г. № 351

О пересмотре ведомственных нормативных актов, регламентирующих вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД

[3]

 

Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 25.11.2002 г. № 165

О проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями здравоохранения

[4]

Постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 28.04.2010 г. № 47

Об утверждении Инструкции о порядке проведения обязательных медицинских осмотров работающих и признании утратившими силу некоторых постановлений Министерства здравоохранения Республики Беларусь

[5]

Санитарные нормы и правила

СанПиН № 2.1.7.14-20-2005 «Правила обращения с медицинскими отходами»

 

 

 

Изготовитель   СП ООО «Фармлэнд» Почтовый адрес:220113 г. Минск, ул. Восточная, 129. Тел\факс (017) 2621417.

По вопросам применения и качества набора обращаться на предприятие-изготовитель СП ООО «Фармлэнд».