ИФА-Сиф-суммарный

Вы здесь

ИФА-Сиф-суммарный

Торговое наименование: 
ИФА-Сиф-суммарный
Международное наименование: 
ИФА-Сиф-суммарный
Категория: ИФА тест-системы
Назначение: Для диагностики заболеваний передаваемых половым путем

Описание

1  Назначение набора

1.1  Набор предназначен для одновременного выявления антител классов А, G и М к Treponema pallidum в сыворотке или плазме крови человека “in vitro” методом твердофазного иммуноферментного «сэндвич»-анализа.

 

2  Характеристика и принцип работы набора

2.1  Состав набора:

Наименование компонента

Количество

Иммуносорбент

2 планшета

Положительный контрольный образец +)

1 флакон, 0,5 мл

Отрицательный контрольный образец )

1 флакон, 1,0 мл

Конъюгат (Кг)

1 флакон, 2,0 мл

Раствор для разведения конъюгата (РР-К)

2 флакона по 9,0 мл

Буферный раствор для субстрата (БРС)

2 флакона по 13 мл

Хромоген ТМБ

1 флакон 1,0 мл

25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т×25)

2 флакона по 28 мл

Стоп-реагент

1 флакон, 12 мл

Комплект ванночки для реагентов с наконечниками для   многоканальных пипеток

2 комплекта

Клейкая пленка

4 штуки

 

2.2  Основные компоненты набора «ИФА-Сиф-суммарный» – иммуносорбент и конъюгат.

Иммуносорбент представляет собой полистирольный планшет, в лунках которого сорбирована смесь рекомбинантных антигенов р17 и tmpA, являющихся аналогами белков Treponema pallidum.

Конъюгат представляет собой смесь рекомбинантных белков р17 и tmpA Treponema pallidum, конъюгированных с пероксидазой хрена.

Положительный контрольный образец – сыворотка крови человека, содержащая антитела к Treponema pallidum, не содержащая антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, вирусу гепатита С и НВs-антиген, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.

Отрицательный контрольный образец – сыворотка крови человека, не содержащая антитела к Treponema pallidum, ВИЧ-1, ВИЧ-2, ВГС и НВs-антиген, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.

Принцип работы набора. При внесении в лунки планшета образцов сывороток инфицированной крови и раствора Кг в рабочем разведении специфичные к Treponema pallidum антитела связываются как с рекомбинантными антигенами, сорбированными на твердой фазе, так и с антигенами, входящими в состав конъюгата, образуя комплексы антиген-антитело. После отмывания несвязавшихся компонентов в лунки планшета добавляют раствор субстрата пероксидазы (перекись водорода) и хромогена ТМБ.

Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя стоп-реагент (0,9 М раствор серной кислоты), и интенсивность окрашивания раствора в лунках измеряют на спектрофотометре как величину оптической плотности (ОП) при длине волны 450 нм.

Величина ОП прямо пропорциональна концентрации специфических антител в образце сыворотки или плазмы крови человека. Чем выше содержание антител в образце сыворотки, тем выше интенсивность окрашивания.

2.3  Набор рассчитан на проведение 24 постановок ИФА: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определений, включая контрольные образцы.

 

3  Меры предосторожности при работе с набором

3.1  Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. Однако работа со всеми исследуемыми образцами сыворотки (плазмы) крови человека, которые следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции, с отработанными растворами и жидкостями, различным оборудованием, которое может быть загрязнено в процессе анализа, требует определенных мер безопасности при использовании набора:

- работу необходимо проводить в специально оборудованном помещении;

- работать необходимо с применением средств индивидуальной защиты и с соблюдением мер предосторожности в соответствии с требованиями [1], [2], и [3].

3.2  Стоп-реагент, содержащий серную кислоту, обладает раздражающим действием. При попадании на кожу и слизистые немедленно промыть большим количеством воды.

3.3  При работе с набором рабочие места должны быть обеспечены приточно-вытяжной вентиляцией.

3.4  Все лица, работающие в лаборатории с наборами, должны проходить обязательный медицинский осмотр в соответствии с требованиями [4].

3.5  Утилизация медицинских отходов и/или неиспользованных наборов с истекшим сроком годности должна производиться в соответствии с требованиями [5].

 

4  Правила работы с набором

4.1  Для исключения ложных результатов исследуемые образцы необходимо готовить и хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Необходимо осветлять образцы сыворотки, содержащие агрегированные компоненты сыворотки или осадок, при помощи центрифугирования в течение 15 мин при скорости вращения 3000 об/мин. Образцы сыворотки (плазмы) крови человека можно хранить при температуре (2-8) °С не более 48 ч. Замороженные образцы (желательно до температуры не менее минус 20 °С) можно хранить не более 3 месяцев. Необходимо избегать повторных циклов замораживания-оттаивания образцов.

Необходимо помнить, что образцы с гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным проростом, содержащими азид натрия, а также длительно хранившиеся без замораживания не пригодны для анализа.

Надежность результатов зависит от выполнения следующих правил:

- не допускается использование набора после окончания срока годности, а также смешивание компонентов наборов разных серий;

- для приготовления каждого реагента должна использоваться отдельная емкость;

- всю используемую для приготовления реагентов посуду не обрабатывать дезрастворами и моющими средствами. В случае необходимости промыть водой питьевой проточной, а затем пять раз ополоснуть дистиллированной водой;

- для работы с хромогеном ТМБ необходимо использовать отдельные емкости для растворов и наконечники для пипеток;

- необходимо обратить внимание на тщательное перемешивание реагентов;

- время между заполнением и опорожнением лунок планшета растворами и реагентами должно быть не менее 30 с. Не допускается подсыхание лунок на всех этапах постановки ИФА;

- при использовании промывателя необходимо следить за состоянием емкости для раствора для промывания планшета и соединительных шлангов: в них не должно быть признаков бактериального или грибкового роста;

- необходимо использовать пипетки автоматические со сменными наконечниками, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);

- дозаторы и рабочие поверхности обрабатывать раствором с объемной долей спирта этилового 70 %. Не использовать хлорамин и другие хлорсодержащие вещества;

- для работы с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами рекомендуется использовать одноразовые наконечники для пипеток. Каждый образец сыворотки, а также реагенты набора необходимо отбирать отдельным наконечником;

- при внесении в лунки раствора Кг в рабочем разведении нельзя касаться наконечником пипетки поверхности планшета и раствора, находящегося в лунках;

- во время проведения анализа следует избегать попадания прямых солнечных лучей на рабочую поверхность.

 

5  Оборудование и материалы, необходимые для проведения анализа

5.1  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов в лунках планшета при длине волны 450 нм и (620-700) нм;

- полу- или автоматическое устройство для промывания планшетов (вошер);

- суховоздушный термостат типа ТС-80 М2, поддерживающий температуру (37±1) °С, или аналогичный ему по характеристикам;

- пипетки одноканальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,02 до 5,0 мл;

- пипетки 8-ми канальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости              до 0,5 мл;

- мерный цилиндр вместимостью 1000 мл;

- колба лабораторная вместимостью 1000 мл;

- флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;

- ванночки для реагентов или чашки Петри (диаметр 100 мм);

- вата медицинская гигроскопическая;

- бумага фильтровальная;

- перчатки резиновые хирургические;

- раствор с объемной долей спирта этилового 70 %;

- раствор с массовой долей перекиси водорода 6 %;

- вода деионизированная или дистиллированная;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива жидких отходов.

 

6  Подготовка к проведению анализа

6.1  Набор реагентов перед проведением анализа извлечь из холодильника, открыть крышку коробки и выдержать компоненты набора при температуре (18-25) °С в течение 30 мин.

Внимание! Все образцы сыворотки (плазмы) крови человека и реагенты перед проведением анализа необходимо тщательно перемешать.

Расход реагентов набора для постановки анализа, который определяется количеством используемых стрипов, приведен в таблице А.1 Приложения А.

6.2  Подготовка иммуносорбента

Иммуносорбент готов к использованию.

Открыть пакет и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре (2-8) °С в течение 3 месяцев.

6.3  Приготовление раствора для промывания планшета

Внимание! Раствор для промывания планшета готовить за 15 мин до начала проведения анализа!

Если флакон с ФСБ-Т×25 содержит осадок, его необходимо прогреть перед использованием при температуре (37±1) °С до полного растворения осадка.

В мерный цилиндр вместимостью 1000 мл внести содержимое флакона с ФСБ-Т×25, затем добавить дистиллированной воды до метки 700 мл и аккуратно перемешать раствор. Раствор можно хранить при температуре (2-8) °С в течение 72 ч.

В случае использования одного или несколько стрипов содержимое флакона с ФСБ-Т×25 интенсивно встряхнуть в течение (20-30) с, отобрать необходимый объем раствора (таблица А.1 Приложения А) в мерный стакан или цилиндр, добавить необходимое количество дистиллированной воды и перемешать раствор.

Неиспользованный ФСБ-Т×25 можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.4  Подготовка К+, К, РР-К, БРС и стоп-реагента

К+, К, РР-К, БРС и стоп-реагент готовы к использованию.

Неиспользованные РР-К, БРС и стоп-реагент после вскрытия флаконов можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

Остаток К+ и К- после вскрытия флакона можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.5  Приготовление раствора Кг в рабочем разведении

Из флакона с Кг отобрать указанный в таблице А.1 Приложения А объем и перенести во флакон с РР-К. Содержимое флакона тщательно перемешать, не допуская образования пены.

В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество РР-К, добавить Кг в соответствии с таблицей А.1 Приложения А и перемешать раствор, не допуская образования пены.

Внимание! Раствор Кг в рабочем разведении готовят непосредственно перед использованием! Раствор Кг в рабочем разведении можно хранить в течение 10 мин при температуре (18-25) °С. При смешивании РР-К и Кг во флаконе допускается появление осадка. Перед использованием содержимое флакона тщательно перемешать. Использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники!

Остаток Кг можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.6  Приготовление рабочего раствора субстрата

Флакон с хромогеном ТМБ необходимо прогреть перед использованием в течение  (3-5) мин при температуре (37±1)° С до полного растворения кристаллов.

Из флакона с хромогеном ТМБ отобрать указанный в таблице А.1 Приложения А объем и перенести во флакон с БРС.

Содержимое флакона осторожно перемешать.

В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество БРС, добавить хромогена ТМБ в соответствии с таблицей А.1 Приложения А и осторожно перемешать раствор.

Внимание! Рабочий раствор субстрата готовить непосредственно перед использованием в защищенном от света месте! Раствор можно хранить не более 10 мин при температуре (18-25)° С в защищенном от света месте.

Раствор необходимо предохранять от попадания света и контакта с металлами или ионами металлов. Перед использованием раствор субстрата должен быть бесцветным или светло-желтого цвета. Посуду, которая будет в ходе реакции контактировать с раствором субстрата, отмывать без применения синтетических моющих средств. Использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники.

Остаток хромогена ТМБ можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8)° С в течение срока годности набора.

 

7   Требования к промыванию планшета

7.1  Для промывания планшета рекомендуется использовать автоматический или полуавтоматический промыватель – вошер; в случае отсутствия вошера можно промывать лунки 8-канальной пипеткой;

- на всех этапах промывания необходимо контролировать заполнение всех лунок и полное удаление (аспирацию) жидкости из них;

- необходимо при каждом промывании все лунки заполнить раствором до краев (0,30-0,35 мл в лунку), без переполнения и перетекания жидкости из соседних лунок;

- необходимо выдерживать лунки, заполненными раствором для промывания планшета, в течение 30 с;

- при каждой аспирации тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамкой со стрипами в перевернутом положении по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена;

- некачественное промывание планшета приводит к получению некорректных результатов.

 

8  Проведение анализа

8.1  В одну лунку планшета внести 0,02 мл (20 мкл) К+, в две другие лунки планшета – по 0,02 мл (20 мкл) К.

В остальные лунки планшета внести по 0,02 мл (20 мкл) неразведенных исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови человека.

Внимание! Общее время внесения контрольных и исследуемых образцов не должно превышать (5-10) мин! Каждый образец необходимо отбирать одноразовым наконечником!

8.2  Внести во все лунки планшета по 0,08 мл (80 мкл) раствора Кг в рабочем разведении (п 6.5). Раствор Кг в рабочем разведении перед внесением перелить из флакона в прилагаемую к набору пластиковую одноразовую ванночку для реагентов.

Содержимое лунок перемешать осторожным постукиванием по краю планшета, при этом желто-зеленый цвет раствора Кг в рабочем разведении должен измениться на голубой.

8.3  Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в течение 30 мин. Допускается инкубация на шейкере при температуре (37±1) °С в течение 20 мин при частоте вращения платформы 500 об/мин.

8.4  Удалить содержимое лунок с помощью промывателя, затем промыть лунки планшета раствором для промывания планшета (п 6.3) пять раз. При промывании во все лунки необходимо внести (0,30-0,35) мл раствора. По окончании промывания тщательно удалить остатки жидкости из лунок, постукивая планшетом в перевернутом положении по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена.

8.5  Во все лунки планшета внести по 0,1 мл (100 мкл) рабочего раствора субстрата (п 6.6). Рабочий раствор субстрата перед внесением перелить из флакона в прилагаемую к набору пластиковую одноразовую ванночку для реагентов. При приготовлении рабочего раствора субстрата (п.6.6) флакон с хромогеном ТМБ необходимо прогреть перед использованием в течение (3-5) мин при температуре (37±1)° С до полного растворения кристаллов.

8.6  Планшет (без пленки  и крышки) инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в защищенном от света месте в течение 10 мин.

Внимание! По окончании инкубации в лунках с образцами сывороток (плазмы) крови, содержащими антитела к Treponema pallidum, произойдет изменение окраски раствора от бесцветной до синей различной интенсивности в зависимости от концентрации антител в исследуемом образце сыворотки (плазме) крови человека.

8.7  Остановить пероксидазную реакцию путем внесения во все лунки по 0,05 мл (50 мкл) стоп-реагента.

Внимание! В лунках с образцами сыворотки (плазмы) крови человека, содержащими антитела к Treponema pallidum, произойдет изменение окраски раствора с синей на желтую различной интенсивности. Проверить чистоту основания стрипов! В случае загрязнения тщательно протереть основание.

8.8  Не позже чем через 10 мин после остановки реакции определить ОП, ОЕ, в лунках в двухволновом режиме – 450 нм относительно (620-650) нм. Как исключение, ОП, ОЕ, можно определять в одноволновом режиме при длине волны 450 нм.

 

 

9  Обработка результатов анализа

9.1  Рассчитать среднее значение ОП для лунок с К- – ОПср К-, ОЕ.

9.2  Результаты учитывать только в том случае если:

- значение ОП в лунке с К+ – ОП К+ – не менее 0,4 ОЕ;

- значение ОПср К- – не более 0,2 ОЕ.

9.3   При соблюдении выше перечисленных условий рассчитать критическое значение (ОПкрит.), ОЕ, по формуле (1):

 

ОПкрит. = ОПср К-+ 0,15                                                                         (1).

 

Результат анализа считать положительным (в сыворотке (плазме) крови человека присутствуют антитела к Treponema pallidum), если значение ОП данного образца больше ОПкрит.

Результат анализа считать отрицательным, если значение ОП данного образца меньше или равно ОПкрит.

9.4  При необходимости рассчитать для каждого исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека значение коэффициента позитивности (КП) по формуле (2):

ОП образца

КП = _______________________                                                                              (2).

ОПкрит.

 

Результат анализа считать положительным (в сыворотке (плазме) крови человека присутствуют антитела к Treponema pallidum), если значение КП исследуемого образца больше 1,0.

Результат анализа считать отрицательным, если значение КП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека меньше или равно 1,0.

При получении положительного результата этот же образец сыворотки (плазмы) крови человека необходимо исследовать повторно не менее чем в двух лунках набора

Все результаты анализа, показавшие себя как положительные в двух лунках иммуносорбента, следует считать положительными в ИФА.

Все результаты анализа, показавшие себя как отрицательные в двух лунках иммуносорбента, следует считать отрицательными в ИФА.

 

Чувствительность  и специфичность набора реагентов  «ИФА-Сиф-суммарный» -100 % для панели  сывороток

Стандарт АТ(+/-)T.pallidum. Стандартная панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела к Treponema pallidum. Кат№ IBS-24 ЗАО «МБС»

 

 

10  Форма выпуска набора

10.1  Набор поставляется в пяти вариантах комплектации:

комплект 1 – для проведения анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 12 постановок ИФА на разборном планшете: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 96 определений, включая контрольные образцы;

комплект 2 – для проведения анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 2 постановок ИФА на монолитных планшетах: 1 постановка – 1 планшет. Всего – 192 определений, включая контрольные образцы;

комплект 3 – для проведения анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 24 постановок ИФА на                2 разборных планшетах: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определений, включая контрольные образцы;

комплект 4 – для проведения анализа на автоматическом анализаторе. Набор рассчитан на проведение 2 постановок ИФА на монолитных планшетах: 1 постановка – 1 планшет. Всего – 192 определений, включая контрольные образцы;

комплект 5 – для проведения анализа на автоматическом анализаторе. Набор рассчитан на проведение 24 постановок ИФА на 2 разборных планшетах: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определений, включая контрольные образцы.

 

11  Условия хранения и применения набора

11.1  Хранение набора должно производиться в чистом, защищенном от влаги и света помещении при температуре                (2-8) °С в течение всего срока годности.

Запрещается замораживать компоненты набора.

11.2  Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.

11.3  Срок годности набора – 12 месяцев.

 

Приложение А

 

Таблица А.1 – Расход реагентов набора для постановки ИФА

 

Объем

реагента, мл

Количество используемых стрипов, шт.

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

Приготовление раствора для промывания планшета

ФСБ-Т×25

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22

28

Дистиллированная

вода

до

50

до

100

до

150

до

200

до

250

до

300

до

350

до

400

до

450

до

500

до

550

до

700

Приготовление раствора Кг в рабочем разведении

РР-К

0,75

1,50

2,25

3,00

3,75

4,50

5,25

6,00

6,75

7,50

8,25

9,00

Кг

0,041

0,083

0,124

0,165

0,206

0,247

0,288

0,329

0,370

0,410

0,452

0,500

Приготовление рабочего раствора субстрата

БРС

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

13,0

Хромоген ТМБ

0,031

0,062

0,093

0,124

0,155

0,186

0,217

0,248

0,279

0,310

0,341

0,400

 

Библиография

 

[1]

 

Санитарные правила

СП 17-69 РБ 98 «Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 29.04.1998 № 18

[2]

 

Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 16.12.1998 г. № 351

О пересмотре ведомственных нормативных актов, регламентирующих вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД

[3]

 

Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 25.11.2002 г. № 165

О проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями здравоохранения

[4]

Постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 28.04.2010 г. № 47

Об утверждении Инструкции о порядке проведения обязательных медицинских осмотров работающих и признании утратившими силу некоторых постановлений Министерства здравоохранения Республики Беларусь

[5]

Санитарные нормы и правила

СанПиН № 2.1.7.14-20-2005 «Правила обращения с медицинскими отходами»

 

 

 

Изготовитель  СП ООО «Фармлэнд»  Почтовый адрес:  220013 г. Минск, ул. Восточная , 129. Тел\факс (017) 2621417

По вопросам применения и качества набора обращаться на предприятие-изготовитель СП ООО «Фармлэнд».