ИФА-общий IgE

Вы здесь

ИФА-общий IgE

Торговое наименование: 
ИФА-общий IgE
Международное наименование: 
ИФА-общий IgE
Категория: ИФА тест-системы
Назначение: Для диагностики аллергических заболеваний

Описание

1.1  Набор предназначен для количественного определения концентрации общего иммуноглобулина Е (IgE) в сыворотке крови “in vitro” методом твердофазного иммуноферментного анализа.

1.2  IgE — класс иммуноглобулинов, содержание которого в сыворотке крови в норме крайне мало. Концентрация IgE в сыворотке крови возрастает постепенно с момента рождения человека до подросткового возраста. У взрослых людей концентрация IgE в норме может достигать 100 МЕ/мл. В пожилом возрасте уровень IgE иногда снижается.

Продукция IgE имеет существенное значение в антигельминтозном иммунитете. При аскаридозе обнаруживается              15–20-кратное повышение концентрации IgE. Однако в развитых странах выявление повышенных концентраций IgE чаще связано с развитием аллергических заболеваний. Определение общего IgE имеет важное прогностическое значение. Его уровень выше 95 % верхнего возрастного предела нормы выявляют у 75 % детей, родители которых имеют аллергические заболевания. Выявление высоких концентраций общего IgE в сыворотке крови является важным вспомогательным средством, позволяющим дифференцировать аллергические заболевания среди множества патологий, клинически проявляющихся как астма, частые заболевания дыхательных путей, хронические риниты и дерматиты. Повышенные концентрации IgE в сыворотке крови отмечают также при гипер-IgE синдроме, лимфосаркоме.

 

2  Характеристика и принцип работы набора

2.1  Состав набора:

Наименование компонента

Количество

Иммуносорбент

1 комплект

Калибровочная проба С0

1 флакон; 0,5 мл или

1 флакон, лиофилизованный препарат

Калибровочная проба С1

1 флакон; 0,5 мл или

1 флакон, лиофилизованный препарат

Калибровочная проба С2

1 флакон; 0,5 мл или

1 флакон, лиофилизованный препарат

Калибровочная проба С3

1 флакон; 0,5 мл или

1 флакон, лиофилизованный препарат

Калибровочная проба С4

1 флакон; 0,5 мл или

1 флакон, лиофилизованный препарат

Калибровочная проба С5

1 флакон; 0,5 мл или

1 флакон, лиофилизованный препарат

Контрольная сыворотка

1 флакон; 0,5 мл или

1 флакон, лиофилизованный препарат

Конъюгат (Кг)

1 флакон; 18 мл

Раствор для разведения сыворотки (РР-С)

1 флакон; 3 мл

20-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т×20)

2 флакона по 14 мл

Раствор тетраметилбензидина (Раствор ТМБ)

1 флакон, 14 мл

Стоп-реагент

1 флакон; 14 мл

Закрывающийся пакет из полиэтиленовой пленки

1 пакет

Примечания

1  Точные значения концентрации IgE в калибровочных пробах и контрольной сыворотке указаны на этикетках флаконов.

2  Закрывающийся пакет из полиэтиленовой пленки входит в состав набора при упаковывании иммуносорбента в пакет из 2-слойного полиэтилена.

 

2.2  Основные компоненты набора «ИФА-общий IgE» – иммуносорбент и конъюгат.

Иммуносорбент представляет собой комплект из двенадцати восьмилуночных полистирольных стрипов, в лунках которых сорбированы мышиные моноклональные антитела к общему IgE.

Конъюгат представляет собой мышиные моноклональные антитела к общему IgE человека, конъюгированные с пероксидазой хрена.

Калибровочные пробы – на основе сыворотки крови крупного рогатого скота или водно-солевого раствора, содержащие известные количества общего IgE, аттестованные по Второму международному референсному препарату для общего IgE  WHO 75/502. Ориентировочные значения концентраций общего IgE в калибровочных пробах – 0; 10; 50; 100; 250;                      500 МЕ/мл.

Контрольная сыворотка – на основе сыворотки крови человека или водно-солевого раствора с известным содержанием общего IgE.

2.3  Принцип работы набора. В наборе «ИФА-общий IgE» использован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к IgE. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата анти-IgE-пероксидаза, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация IgE, содержащегося в исследуемом образце, и связывание его с конъюгатом. При удалении содержимого из лунок и промывке происходит удаление избытка конъюгата анти-IgE-пероксидаза, не связавшегося с иммобилизованным в ходе инкубации IgE. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству IgE в исследуемом образце (Рис.1).

Рисунок 1 – Схема анализа

 

Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна концентрации IgE в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация IgE в исследуемых образцах.

2.4  Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной пробы для измерения значения оптической плотности (ОП) раствора ТМБ. Всего – 96 определений при использовании всех стрипов одновременно.

Набор рассчитан на 4 постановки иммуноферментного анализа: 1 постановка – 3 стрипа (24 лунки).

ПримечаниеВ случае дробного применения набор может быть использован только в течение месяца после вскрытия компонентов набора.

2.5  Набор позволяет определять концентрацию IgE в сыворотке крови человека в диапазоне от 2,3 до 475,0 МЕ/мл.

2.6  Продолжительность анализа составляет 1 ч 45 мин.

 

3  Меры предосторожности при работе с набором

3.1  Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. Однако работа со всеми исследуемыми образцами сыворотки (плазмы) крови человека, которые следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции, с отработанными растворами и жидкостями, различным оборудованием, которое может быть загрязнено в процессе анализа, требует определенных мер безопасности при использовании набора:

- работу необходимо проводить в специально оборудованном помещении;

- работать необходимо с применением средств индивидуальной защиты и с соблюдением мер предосторожности в соответствии с требованиями [1], [2], и [3].

3.2  Стоп-реагент, представляет собой 1Н раствор соляной кислоты и обладает раздражающим действием. В случае попадания стоп-реагента на кожу и слизистые необходимо немедленно промыть пораженный участок большим количеством проточной воды.

3.3  При работе с набором рабочие места должны быть обеспечены приточно-вытяжной вентиляцией.

3.4  Все лица, работающие в лаборатории с наборами, должны проходить обязательный медицинский осмотр в соответствии с требованиями [4].

3.5  Утилизация медицинских отходов и/или неиспользованных наборов с истекшим сроком годности должна производиться в соответствии с требованиями [5].

 

4  Правила работы с набором

4.1  Для исключения ложных результатов исследуемые образцы сыворотки крови человека необходимо готовить и хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Необходимо осветлять образцы сыворотки крови человека, содержащие агрегированные компоненты сыворотки или осадок, при помощи центрифугирования в течение 5 мин при скорости вращения (1000-1500) об/мин. Образцы сыворотки крови человека можно хранить при температуре (2-8) °С не более            48 ч. При необходимости более длительного хранения (до 3 месяцев) рекомендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре минус 20 °С и ниже. Не допускается повторное замораживание образца.

Для проведения анализа не следует использовать плазму крови человека, образцы сыворотки крови человека с гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным проростом, содержащие азид натрия, а также длительно хранившиеся без замораживания.

Надежность результатов зависит от выполнения следующих правил:

- не допускается использование набора после окончания срока годности, а также смешивание компонентов наборов разных серий;

- для приготовления каждого реагента должна использоваться отдельная емкость;

- вся используемая для приготовления реагентов посуда должна быть тщательно вымыта и сполоснута дистиллированной водой;

- необходимо обратить внимание на тщательное перемешивание реагентов;

- запрещается возвращать избыток Кг, раствора ТМБ и стоп-реагента из ванночек во флаконы;

- из флаконов с открытыми крышками происходит испарение, которое может привести к получению некорректных результатов при повторном использовании реагентов. После окончания внесения реагентов в лунки планшета на каждой стадии анализа необходимо плотно закрывать крышки флаконов и помещать в рекомендуемые условия хранения;

- каждый образец сыворотки крови человека, а также реагенты набора необходимо отбирать отдельным наконечником.

- не допускается подсыхание лунок на всех этапах постановки ИФА;

- необходимо использовать пипетки полуавтоматические со сменными наконечниками, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);

- во время проведения анализа следует избегать попадания прямых солнечных лучей на рабочую поверхность.

4.2  При вскрытии и растворении лиофилизованных компонентов необходимо следить, чтобы на крышке и стенках флаконов не оставалось сухого вещества.

4.3  При использовании набора для проведения нескольких независимых серий анализов необходимо иметь в виду, что для каждого независимого эксперимента необходимо построение новой калибровочной кривой и рекомендуется определение концентрации IgE в контрольной сыворотке.

 

5  Оборудование и материалы, необходимые для проведения анализа

5.1  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов в лунках планшета при длине волны 450 нм;

- термостатируемый шейкер, позволяющий производить встряхивание с амплитудой колебаний (3-4) мм и частотой              (8-13) Гц ((400-800) об/мин) при температуре 37 °С;

- холодильник бытовой, поддерживающий температуру (2-8) °С;

- полу- или автоматическое устройство для промывания планшетов (вошер);

- пипетки одноканальные автоматические переменного объема со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,05 до 5,0 мл (от 5 до 5000 мкл);

- пипетки 8-ми канальные автоматические переменного объема со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости до 0,3 мл (до 300 мкл);

- мерный цилиндр вместимостью 500 мл;

- ванночки для реагентов или чашки Петри (диаметр 100 мм);

- пробирки одноразовые с пробками вместимостью 3 мл или флаконы стеклянные вместимостью (10-15) мл;

- штатив для пробирок;

- вата медицинская гигроскопическая;

- бумага фильтровальная;

- перчатки резиновые хирургические;

- раствор с объемной долей этилового спирта 70 %;

- раствор с массовой долей перекиси водорода 6 %;

- вода дистиллированная или деионизированная;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива жидких отходов.

 

6  Подготовка к проведению анализа

6.1  Набор реагентов перед проведением анализа извлечь из холодильника, открыть крышку коробки и выдержать компоненты набора при температуре (18-25) °С в течение 30 мин, но не более 1 ч.

Внимание! Все образцы сывороток и реагенты перед проведением анализа тщательно перемешать!

6.2  Подготовка иммуносорбента

Вскрыть пакет и установить на рамку необходимое количество стрипов иммуносорбента. Оставшиеся стрипы поместить в пакет с этикеткой (при упаковывании иммуносорбента в пакет из 2-слойного полиэтилена), который затем вложить в закрывающийся пакет из полиэтиленовой пленки и герметично закрыть.

Стрипы иммуносорбента можно хранить в пакете с герметично закрытым замком при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности.

6.3  Подготовка растворов калибровочных проб и контрольной сыворотки

Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыворотки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенкам флаконов или пробкам. Открыть флаконы и положить пробки перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сывороткой внести по 0,5 мл (500 мкл) дистиллированной воды. Флаконы закрыть пробками, выдержать в течение 10 мин при температуре (18-25) °С и аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая образования пены. В течение следующих 10 мин выдержать флаконы при температуре (18-25) °С, периодически перемешивая их содержимое.

Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использованию.

Растворенные калибровочные пробы и контрольную сыворотку, а также вскрытые флаконы с жидкими калибровочными пробами и контрольной сывороткой можно хранить при температуре (2-8) °С не более 1 месяца.

6.4  Приготовление раствора для промывания планшета

В мерный цилиндр вместимостью 500 мл внести содержимое флакона с ФСБ-Т×20, затем добавить дистиллированной воды до метки 280 мл и аккуратно перемешать раствор, избегая образования пены.

В случае использования одного или несколько стрипов содержимое флакона с ФСБ-Т×20 интенсивно встряхнуть в течение (20-30) с, отобрать необходимое количество ФСБ-Т×20 в мерный стакан или цилиндр и развести его дистиллированной водой в 20 раз.

Пример – В мерный цилиндр внести 5 мл ФСБ-Т×20 и 95 мл дистиллированной воды, перемешать раствор, избегая образования пены.

Раствор для промывания планшета можно хранить закрытым при температуре (2-8) °С не более 5 суток.

Неиспользованный ФСБ-Т×20 можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.5  Подготовка Кг, РР-С и раствора ТМБ

Кг, РР-С и раствор ТМБ готовы к использованию. Расход Кг на один стрип (8 лунок) составляет 1,5 мл; расход раствора ТМБ на один стрип – 1,15 мл.

После вскрытия флаконов растворы можно хранить при температуре (2-8) °С не более 1 месяца.

6.6  Подготовка стоп-реагента

Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип составляет 1,15 мл.

После вскрытия флакона раствор можно хранить при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности.

6.7  Подготовка проб исследуемых образцов сыворотки крови человека

Если значения концентрации IgE в исследуемых образцах сыворотки крови по предварительным данным превышает значение концентрации калибровочной пробы С5, МЕ/мл, то исследуемые образцы следует развести РР-С в 20 раз.

Пробирки для разведения исследуемых образцов сыворотки крови человека поместить в штатив и маркировать следующим образом: №1, №2 и т.д.

Пример

1  Образец № 1 (разведение в 20 раз): в пробирку, маркированную «№ 1», внести 0,19 мл (190 мкл) РР-С и 0,01 мл             (10 мкл) исследуемого образца сыворотки крови, тщательно перемешать раствор, избегая образования пены.

Внимание! Разводить образцы сыворотки крови следует только в день проведения анализа. При повторной постановке тех же образцов сыворотки крови человека необходимо делать новое разведение.

 

7   Требования к промыванию планшета

7.1  Для промывания планшета рекомендуется использовать автоматический или полуавтоматический промыватель – вошер; в случае отсутствия вошера можно промывать лунки 8-канальной пипеткой;

- на всех этапах промывания необходимо контролировать заполнение всех лунок и полное удаление (аспирацию) жидкости из них;

- необходимо при каждом промывании все лунки заполнить раствором до краев (0,30-0,35 мл в лунку), без переполнения и перетекания жидкости из соседних лунок, встряхнуть планшет на шейкере в течение (5-10) с с последующим декантированием;

- при каждом декантировании тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамкой со стрипами в перевернутом положении по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена;

- некачественное промывание планшета приводит к получению некорректных результатов.

 

8  Проведение анализа

8.1  Составить протокол маркирования лунок в соответствии с рисунком 1.

 

 

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ТМБ

ТМБ

№1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

B

С0

С0

№1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

C

С1

С1

№2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

D

С2

С2

№2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

E

С3

С3

№3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

F

С4

С4

№3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

G

С5

С5

№4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

H

КС

КС

№4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Рисунок 1

Лунки маркировать следующим образом:

- А1, А2 — для измерения величины ОП раствора ТМБ;

- В1, В2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С0;

- С1, С2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С1;

- D1, D2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С2;

- E1, E2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С3;

- F1, F2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С4;

- G1, G2 — для измерения величины ОП калибровочной пробы С5;

- Н1, Н2 — для измерения величины ОП контрольной сыворотки (КС);

- А3,В3 - …. — для измерения величины ОП образцов исследуемых сывороток крови человека №1 - ….

8.2  Внести во все лунки стрипов иммуносорбента, кроме лунок А1 и А2, по 0,15 мл (150 мкл) Кг.

8.3  Внести в дубликатах в соответствующие лунки стрипов иммуносорбента по 0,02 мл (20 мкл) калибровочных проб и контрольной сыворотки, в оставшиеся лунки – по 0,02 мл (20 мкл) проб исследуемых образцов сыворотки крови.

Внимание! Общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и проб исследуемых образцов сыворотки крови не должно превышать 15 мин, иначе время инкубации разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным результатам!

8.4  Инкубировать планшет на термостатируемом шейкере со скоростью (500-800) об/мин при температуре (37±1) °С в течение 1 ч 30 мин либо в термостате при температуре (37±1) °С в течение 2 ч 15 мин.

8.5  Удалить содержимое лунок с помощью промывателя в контейнер с дезинфицирующим раствором, затем промыть лунки планшета раствором для промывания планшета (п 6.4) пять раз.

8.6  Внести немедленно во все лунки по 0,1 мл (100 мкл) раствора ТМБ и инкубировать планшет в защищенном от света месте при температуре (18-25) °С в течение (15-30) мин в зависимости от степени развития окраски или на термостатируемом шейкере со скоростью (500-800) об/мин при температуре (37±1) °С в течение 10 мин.

8.7  Остановить реакцию путем внесения во все лунки стрипов иммуносорбента по 0,1мл (100 мкл) стоп-реагента с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор ТМБ.. Планшет встряхнуть на шейкере в течение (1-2) мин.

Внимание! В  лунках планшета иммуносорбента с образцами, содержащими IgE, произойдет изменение окраски раствора с голубой на желтую различной интенсивности.

Примечание – Максимальная ОП не должна превышать пределов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная ОП – не более 2,5 ОЕ.

8.8  Не позже чем через 1 мин после остановки реакции, определить ОП в лунках стрипов иммуносорбента в одноволновом режиме при длине волны 450 нм.

В случае невозможности по техническим причинам своевременно измерить ОП растворов в лунках на фотометре, планшет можно хранить при температуре (2-8) °С не более 20 мин.

8.9  Схема анализа приведена в таблице 1.

Таблица 1 – Схема проведения анализа

Стадия анализа и реагенты

Номер пары лунок в соответствии с протоколом маркировки лунок по п 8.1

1

2

3

4

5

6

7

8

9-48

Конъюгат Е, мкл

150

150

150

150

150

150

150

150

КП С0, мкл

20

КП С1, мкл

20

КП С2, мкл

20

КП С3, мкл

20

КП С4, мкл

20

КП С5, мкл

20

КС, мкл

20

СХ, мкл

20

Инкубация №1

(37±1) °С, термостатируемый шейкер, 1 ч 30 мин

либо (37±1) °С, термостат, 2 ч 15 мин

5-кратная промывка: раствором для промывания лунок иммуносорбента, мкл

300

300

300

300

300

300

300

300

300

Раствор ТМБ, мкл

100

100

100

100

100

100

100

100

100

Инкубация №2

(18-25)° С, (15-30) мин, либо (37±1) °С, термостат, 10 мин

место, защищенное от света

Стоп-реагент, мкл

100

100

100

100

100

100

100

100

100

Перемешивание

(18-25) °С, шейкер, (1-2) мин

Измерение ОП растворов в лунках стрипов, ОЕ

Спектрофотометр, 450 нм

Расчет результатов

Калькулятор и масштабная бумага

либо соответствующая компьютерная программа

Примечания

1  КП – калибровочная проба;

2  КС – контрольная сыворотка;

3  СХ – анализируемые пробы.

9  Обработка результатов анализа

9.1  Если программа фотометра позволяет вычитать среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках А1 и А2 из значений ОП растворов всех остальных лунок, то для дальнейших расчетов необходимо использовать величину В — среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках, содержащих калибровочные или исследуемые пробы образцов сыворотки крови, ОЕ.

Если программа фотометра не позволяет вычитать среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках А1 и А2, то необходимо пользоваться формулой    В–BТ, где ВТ — среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках А1 и А2, ОЕ; В — среднее значение ОП растворов в лунках, содержащих калибровочные или исследуемые пробы образцов сыворотки крови, ОЕ.

Примечание - Среднее арифметическое значение ОП растворов в лунках А1 и А2 не должно превышать 0,09 ОЕ.

9.2  Рассчитать величину В, ОЕ, для каждой пары лунок, содержащих калибровочные пробы, контрольную сыворотку, пробы исследуемых образцов сыворотки крови.

9.3  В линейных координатах построить для калибровочных проб график зависимости величины В, ОЕ, от концентрации IgE в калибровочных пробах, МЕ/мл, откладывая на оси ординат значения ОП, ОЕ, а по оси абсцисс – значения концентраций IgE, МЕ/мл, в соответствующих калибровочных пробах (Рис. 2).

Внимание! Запрещается использовать для оценки реальных экспериментальных данных!

9.4  Определить по калибровочному графику концентрацию IgE в пробах исследуемых образцов сыворотки крови, МЕ/мл. В случае дополнительного разведения образцов сыворотки крови необходимо измеренную концентрацию IgE умножить на фактор разведения.

Примечание – В наборе «ИФА – общий IgE» значения концентраций калибровочных проб выражены в МЕ/мл. Для пересчета концентраций в нг/мл необходимо значение концентрации в МЕ/мл умножить на 2,4.

 

ОП при 450 нм

Концентрация IgE, МЕ/мл

 

Рисунок 2. Типичный калибровочный график

 

9.5  Экстраполяция калибровочного графика для значений концентрации IgE, превышающих значение концентрации калибровочной пробы С5, не допускается. Для точного определения значения концентрации в таких образцах необходимо выполнить их разведение в соответствии с п 6.7.

 

10  Аналитические характеристики набора

10.1  Специфичность. Не обнаружено перекрестной реакции моноклональных анти-IgE-антител с IgG, IgM, IgA.

10.2  Коэффициент вариации результатов определения IgE в одном и том же образце сыворотки крови с использованием набора «ИФА-общий IgE» не превышает 8 %.

10.3  Линейность. Зависимость концентрации IgE в образцах сыворотки крови при разведении их РР-С имеет линейный характер в диапазоне концентраций калибровочных проб С15, МЕ/мл и составляет ± 10%.

Примечание – Так как содержащиеся в сыворотке крови человека антитела имеют гетерогенную природу, при разведении исследуемых образцов зависимость определяемой концентрации IgE от степени разведения в отдельных случаях может носить нелинейный характер.

10.4  Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» IgE – отношение измеренной к расчетной концентрации IgE в пробе, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы С2. Процент открытия составляет (90–110) %.

10.5  Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концентрация IgE в сыворотке крови человека не превышает 2,3 МЕ/мл.

10.6  Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, основанных на «сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита зависимость величины ОП от концентрации становится обратно пропорциональной (так называемый хук-эффект высоких концентраций). При использовании набора «ИФА-общий IgE» хук-эффект не обнаружен вплоть до концентрации IgE    10 000 МЕ/мл.

10.7  Диапазон ожидаемых значений. Содержание общего IgE измеряли в сыворотке крови, взятой с 9 до 11 ч, у 79 здоровых лиц и 226 больных, страдающих различными аллергическими заболеваниями, в возрасте 21–45 лет. У 48 % здоровых лиц концентрация общего IgE была ниже 25 МЕ/мл, у 34 % – от 25 до 100 МЕ/мл, у 18 % – более 100 МЕ/мл. У 8 % больных, страдающих аллерги­ческими заболеваниями, концентрация общего IgE была ниже 25 МЕ/мл, у 22 % – от 25 до 100 МЕ/мл, у 70 % – более 100 МЕ/мл.

Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности метода, особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изготовителем значения только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определены диапазоны ожидаемых значений, характерных для конкретной популяции в месте расположения лаборатории.

10.8  В наборе «ИФА-общий IgE» значения концентраций калибровочных проб выражены в МЕ/мл. Для пересчета концентраций общего IgE в нг/мл необходимо значение концентрации в МЕ/мл умножить на 2,4.

 

11  Форма выпуска набора

11.1  Набор выпускается в двух вариантах комплектации:

комплект 1 – проведение анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной пробы для измерения значения ОП раствора ТМБ. Набор рассчитан на 4 постановки ИФА: 1 постановка – 3 стрипа (24 лунки). Всего – 96 определений;

комплект 2 – для проведения анализа на автоматическом анализаторе открытого типа. Набор рассчитан на проведение анализа в монопликатах 88 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной пробы для измерения значения ОП раствора ТМБ. Набор рассчитан на 6 постановок иммуноферментного анализа: 1 постановка –            2 стрипа (16 лунок). Всего – 96 определений.

 

12  Условия хранения и применения набора

12.1  Хранение набора должно производиться в упаковке предприятия-изготовителя в чистом, защищенном от влаги и света помещении при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до 25 °С не более 5 суток.

Запрещается замораживать компоненты набора.

12.2  Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.

12.3  Срок годности набора – 12 месяцев.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Приложение А

 

Библиография

 

 

[1]

 

Санитарные правила

СП 17-129 РБ 2000 «Безопасность работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности и гельминтами», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 27.07.2000 г. № 40

[2]

 

Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 16.12.1998 г. № 351

О пересмотре ведомственных нормативных актов, регламентирующих вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД

[3]

 

Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 25.11.2002 г. № 165

О проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями здравоохранения

[4]

 

Постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 28.04.2010 г. № 47

Об утверждении Инструкции о порядке проведения обязательных медицинских осмотров работающих и признании утратившими силу некоторых постановлений Министерства здравоохранения Республики Беларусь

[5]

 

Санитарные нормы и правила

СанПиН № 2.1.7.14-20-2005 «Правила обращения с медицинскими отходами»

 

 

 

 

Изготовитель  СП ООО «Фармлэнд»  Почтовый адрес: 220113 г. Минск, ул. Восточная, 129. Тел\факс (017) 2621417.

По вопросам применения и качества набора обращаться на предприятие-изготовитель СП ООО «Фармлэнд».